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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于液相测氨基酸的问题
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hufen-0328

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】关于液相测氨基酸的问题 已有6人参与

用的是Venusil-AA氨基酸分析法测定鱼肉中的氨基酸
标样出的色谱图很好
样品出峰很少而且很小，加大浓度后还是不行
怀疑是样品水解过程中出了问题
我的水解方法：0.2g左右的鱼干粉加入5mL6mol/L的盐酸，抽真空后封口，110度
水解24h
想请问做过的朋友，我的水解过程有没有问题?再有就是水解后是什么颜色的?我的呈棕色，发现我处理的标品在放置一天后，颜色由无色变成了黄色，是不是我的样品中的氨基酸在水解的过程中已被氧化了？
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1楼 2010-08-09 14:37:12
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hufen-0328

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by pkming at 2010-08-09 15:16:35:
我用的不是方法包，直接用PITC衍生，普通的C18色谱柱。一般衍生是比较稳定的，PITC衍生产物比其他衍生又稳定些，但是建议现做先衍生（一般都要求这样），不要超过1d，否则衍生物不稳定。
问题我怀疑还是出现在水 ...

恩 ，是pH的问题，我把水解液蒸干，再用0.1mol/L的HCl溶解后，测出来的图谱和标品一样，杂质也很少，但就是算出来结果偏低，理论上应该每种有百分之几，但我的计算出来只有零点几或是零点零几，请问这有可能是什么问题呢？
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7楼2010-08-10 08:50:39
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pkming

金虫 (正式写手)
★ ★
zxz.1982(金币+2):感谢交流 2010-08-09 15:05:02
从你描述的情况来看，水解没有问题。水解后的颜色我做的也是这样，棕色，没问题。如果有黑色沉淀则是碳化了。
酸水解确实对某几种氨基酸有破坏作用。如果你怀疑是水解破坏了大部分氨基酸可以将氨基酸做对比水解。
水解样品的后续处理你是怎样做的，有没有损失？还有会不会水解不彻底没有将氨基酸释放出来

[ Last edited by pkming on 2010-8-9 at 14:44 ]
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2楼2010-08-09 14:43:50
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hufen-0328

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by pkming at 2010-08-09 14:43:50:
从你描述的情况来看，水解没有问题。水解后的颜色我做的也是这样，棕色，没问题。如果有黑色沉淀则是碳化了。
酸水解确实对某几种氨基酸有破坏作用。如果你怀疑是水解破坏了大部分氨基酸可以将氨基酸做对比水解。 ...

恩 ，有少量黑色沉淀，后续衍生方法为Venusil-AA方法包所附方法

200微升水解样品，加入20微升正亮内标，100微升三乙胺-乙腈，100微升异硫氰氨苯酯-乙腈，1h后加入正己烷400微升，取下清液过滤后进样测定，与标品的方法是一样的，但是标品有结果，样品没有。

是不是衍生产物很不稳定啊？我做了很多次，有的时候标品都没有结果，
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3楼2010-08-09 15:00:41
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pkming

金虫 (正式写手)
hufen-0328(金币+3):专业，热心，非常感谢 2010-08-09 15:42:54
我用的不是方法包，直接用PITC衍生，普通的C18色谱柱。一般衍生是比较稳定的，PITC衍生产物比其他衍生又稳定些，但是建议现做先衍生（一般都要求这样），不要超过1d，否则衍生物不稳定。
问题我怀疑还是出现在水解这一块。建议注意一下几个方面
1、水解过程中注意充氮气，快速封口，做好保护
2、用混合氨基酸做水解对比，来验证水解对氨基酸的影响，
3、你是直接用水解样衍生的，这样不妥。应该浓缩一下，还有样品的PH对后续衍生会影响。（建议对水解后的样品做相应的处理，我认为这是关键）
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4楼2010-08-09 15:16:35
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