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hufen-0328

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助】关于液相测氨基酸的问题 已有6人参与

用的是Venusil-AA氨基酸分析法测定鱼肉中的氨基酸
标样出的色谱图很好
样品出峰很少而且很小,加大浓度后还是不行
怀疑是样品水解过程中出了问题
我的水解方法:0.2g左右的鱼干粉加入5mL6mol/L的盐酸,抽真空后封口,110度
水解24h
想请问做过的朋友,我的水解过程有没有问题?再有就是水解后是什么颜色的?我的呈棕色,发现我处理的标品在放置一天后,颜色由无色变成了黄色,是不是我的样品中的氨基酸在水解的过程中已被氧化了?
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hufen-0328

新虫 (初入文坛)

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Originally posted by pkming at 2010-08-09 14:43:50:
从你描述的情况来看,水解没有问题。水解后的颜色我做的也是这样,棕色,没问题。如果有黑色沉淀则是碳化了。
酸水解确实对某几种氨基酸有破坏作用。如果你怀疑是水解破坏了大部分氨基酸可以将氨基酸做对比水解。 ...

恩 ,有少量黑色沉淀,后续衍生方法为Venusil-AA方法包所附方法

200微升水解样品,加入20微升正亮内标,100微升三乙胺-乙腈,100微升异硫氰氨苯酯-乙腈,1h后加入正己烷400微升,取下清液过滤后进样测定,与标品的方法是一样的,但是标品有结果,样品没有。

是不是衍生产物很不稳定啊?我做了很多次,有的时候标品都没有结果,
3楼2010-08-09 15:00:41
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hufen-0328

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by pkming at 2010-08-09 15:16:35:
我用的不是方法包,直接用PITC衍生,普通的C18色谱柱。一般衍生是比较稳定的,PITC衍生产物比其他衍生又稳定些,但是建议现做先衍生(一般都要求这样),不要超过1d,否则衍生物不稳定。
问题我怀疑还是出现在水 ...

恩,我再试试,谢谢了啊!能不能给我留个邮箱,我再遇到问题可以请教你!非常感谢了!
5楼2010-08-09 15:41:52
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hufen-0328

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by pkming at 2010-08-09 15:16:35:
我用的不是方法包,直接用PITC衍生,普通的C18色谱柱。一般衍生是比较稳定的,PITC衍生产物比其他衍生又稳定些,但是建议现做先衍生(一般都要求这样),不要超过1d,否则衍生物不稳定。
问题我怀疑还是出现在水 ...

恩 ,是pH的问题,我把水解液蒸干,再用0.1mol/L的HCl溶解后,测出来的图谱和标品一样,杂质也很少,但就是算出来结果偏低,理论上应该每种有百分之几,但我的计算出来只有零点几或是零点零几,请问这有可能是什么问题呢?
7楼2010-08-10 08:50:39
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