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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】RP-HPLC分离蛋白质样品遇到的奇怪现象
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】RP-HPLC分离蛋白质样品遇到的奇怪现象 已有5人参与

本人最近在做RP-HPLC分离蛋白质
柱子：C8 孔径 300 A
A液： 98% 水     2% 乙腈 0.1% TFA
B液： 90% 乙腈  10%水   0.1% TFA
样本均为蛋白质复杂样本，每个组分大概包括50-100个左右的蛋白，只是分力量不同（楼下有图）
A-B: <20KD
C-H: 20-150 KD （c-h 分子量逐渐增大）
A-B图分离效果还可以接受，但是C-H分离效果很差，不知道原因，请高手指点。
另外，我考虑可能是蛋白质分离比较大 300 A的孔径可能不合适，但是我改用1000A的柱子效果也差不多是这样。请有相关方面经验的高手指教。
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1楼 2010-08-09 09:48:58
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 皖山潜凤 at 2010-08-13 14:32:11:




不过说的对， 对于大分子还是用280好， 214主要是针对小肽的。

呵呵，谢谢。我问了一下ABI的技术支持，他认为跟分子量分离效果相关的因素除了Pore size 之外，还跟固定相的C含量有关，他建议用下C4试试，好比C18不能分离蛋白一样的道理。280我用了，尽管信号很低，但是分离效果还是不好。214针对 peptide bond，比280灵敏，尤其当样品量比较低的生活，280可能没有214效果好。不过，很感谢你热心的回答。
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10楼2010-08-13 15:07:10
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
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2楼2010-08-09 09:49:37
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sqhnsd

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-09 10:32:34:
检测波长

214 nm
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4楼2010-08-09 13:59:58
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音
sqhnsd(金币+1): 2010-08-09 14:58:45
214nm干扰太大了，基线不稳是肯定的，飘的没法看
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Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
5楼2010-08-09 14:05:47
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