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sqhnsd

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】RP-HPLC分离蛋白质样品遇到的奇怪现象 已有5人参与

本人最近在做RP-HPLC分离蛋白质
柱子:C8 孔径 300 A
A液: 98% 水     2% 乙腈 0.1% TFA
B液: 90% 乙腈  10%水   0.1% TFA
样本均为蛋白质复杂样本,每个组分大概包括50-100个左右的蛋白,只是分力量不同(楼下有图)
A-B: <20KD
C-H: 20-150 KD (c-h 分子量逐渐增大)
A-B图分离效果还可以接受,但是C-H分离效果很差,不知道原因,请高手指点。
另外,我考虑可能是蛋白质分离比较大 300 A的孔径可能不合适,但是我改用1000A的柱子效果也差不多是这样。请有相关方面经验的高手指教。
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 皖山潜凤 at 2010-08-13 14:32:11:




不过说的对, 对于大分子还是用280好, 214主要是针对小肽的。

呵呵,谢谢。我问了一下ABI的技术支持,他认为跟分子量分离效果相关的因素除了Pore size 之外,还跟固定相的C含量有关,他建议用下C4试试,好比C18不能分离蛋白一样的道理。280我用了,尽管信号很低,但是分离效果还是不好。214针对 peptide bond,比280灵敏,尤其当样品量比较低的生活,280可能没有214效果好。不过,很感谢你热心的回答。
10楼2010-08-13 15:07:10
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

2楼2010-08-09 09:49:37
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-09 10:32:34:
检测波长

214 nm
4楼2010-08-09 13:59:58
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音

sqhnsd(金币+1): 2010-08-09 14:58:45
214nm干扰太大了,基线不稳是肯定的,飘的没法看
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
5楼2010-08-09 14:05:47
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