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sqhnsd

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助】RP-HPLC分离蛋白质样品遇到的奇怪现象 已有5人参与

本人最近在做RP-HPLC分离蛋白质
柱子:C8 孔径 300 A
A液: 98% 水     2% 乙腈 0.1% TFA
B液: 90% 乙腈  10%水   0.1% TFA
样本均为蛋白质复杂样本,每个组分大概包括50-100个左右的蛋白,只是分力量不同(楼下有图)
A-B: <20KD
C-H: 20-150 KD (c-h 分子量逐渐增大)
A-B图分离效果还可以接受,但是C-H分离效果很差,不知道原因,请高手指点。
另外,我考虑可能是蛋白质分离比较大 300 A的孔径可能不合适,但是我改用1000A的柱子效果也差不多是这样。请有相关方面经验的高手指教。
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致死之眠

金虫 (知名作家)

梦幻初音

sqhnsd(金币+1): 2010-08-09 14:58:45
214nm干扰太大了,基线不稳是肯定的,飘的没法看
Iamendlishdi,Myenglishisveryhaoveryqiangda
5楼2010-08-09 14:05:47
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

2楼2010-08-09 09:49:37
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-09 10:32:34:
检测波长

214 nm
4楼2010-08-09 13:59:58
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sqhnsd

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 致死之眠 at 2010-08-09 14:05:47:
214nm干扰太大了,基线不稳是肯定的,飘的没法看

可能不是这个原因,因为我的样品(蛋白质)经过丙酮沉淀,其它杂质比较少,应该比较纯。而且,前两张HPLC图可以看出复杂蛋白的分离还是可以的,只是后面的不行
6楼2010-08-09 14:58:36
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