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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量 已有13人参与

宿主菌:BL21(DE3)
表达载体:PET-28a
目的蛋白:63KD
IPTG:终浓度为1mM
诱导温度是:37度
转速:200rmp
请大家多多指教,做了好几次都没有见效果。
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dcb005

金虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:03:30
引用回帖:
Originally posted by 黎亚丽 at 2010-08-03 09:09:33:

你说的是不是上清和沉淀都得用SDS-PAGE检测呢?还有怎么看基因信号肽?信号肽和蛋白分泌到胞外有关系吗啊?TCA是什么意思?

有的蛋白可溶在上清中,有的表达量太高在包涵体中,信号肽可用singnal P预测,TCA是浓缩蛋白的方法,比如要是分泌到胞外,培养基太多,蛋白PAGE根本看不出来,需要浓缩再测蛋白
★穷则独善其身,达则兼济天下★
14楼2010-08-03 09:55:03
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lxyyzz

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
换个其他的PET载体试试
2楼2010-08-02 13:23:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流u 2010-08-02 17:43:18
降低IPTG浓度和诱导温度,增加诱导时间试下
3楼2010-08-02 14:21:23
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流! 2010-08-02 20:52:39
你的温度太高了吧,降低一下试一试?还有转速也降一下
4楼2010-08-02 18:45:51
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