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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量
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黎亚丽

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】如何提高PET表达系统的蛋白表达量 已有13人参与

宿主菌：BL21（DE3)
表达载体：PET-28a
目的蛋白：63KD
IPTG：终浓度为1mM
诱导温度是：37度
转速：200rmp
请大家多多指教，做了好几次都没有见效果。
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1楼 2010-08-02 11:03:06
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dcb005

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-08-05 06:03:30
引用回帖:
Originally posted by 黎亚丽 at 2010-08-03 09:09:33:

你说的是不是上清和沉淀都得用SDS-PAGE检测呢？还有怎么看基因信号肽？信号肽和蛋白分泌到胞外有关系吗啊？TCA是什么意思？

有的蛋白可溶在上清中，有的表达量太高在包涵体中，信号肽可用singnal P预测，TCA是浓缩蛋白的方法，比如要是分泌到胞外，培养基太多，蛋白PAGE根本看不出来，需要浓缩再测蛋白
赞一下(2人) 回复此楼
★穷则独善其身,达则兼济天下★
14楼2010-08-03 09:55:03
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
换个其他的PET载体试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-08-02 13:23:49
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流u 2010-08-02 17:43:18
降低IPTG浓度和诱导温度，增加诱导时间试下
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-02 14:21:23
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+1):欢迎交流！ 2010-08-02 20:52:39
你的温度太高了吧，降低一下试一试？还有转速也降一下
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-08-02 18:45:51
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