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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求SMD1168摇瓶及上罐发酵的详细操作
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嘉笛

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求SMD1168摇瓶及上罐发酵的详细操作 已有2人参与

各位有SMD1168摇瓶及上罐发酵的详细操作手册吗？其与GS115操作上有什么区别？甲醇诱导表达时还需要补加甘油吗？望详细介绍，不胜感激，急需！
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1楼 2010-07-30 19:23:26
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
你可以在invitrogen主页下载到比赤酵母操作手册。
另外我只做过摇瓶发酵，都是最小甘油培养基生长好后，收集菌体用最小甲醇培养基诱导。
大量发酵时是不收集菌体的，等到甘油利用到差不多了（如何检测，不知道），加甲醇进行诱导。我认为诱导时加甘油，酵母会吃甘油而不是甲醇，肯定影响诱导的。
这方面我做的也不深，你可以看看比较权威的文献，点数高点的，看别人发酵时怎么做的。另外你摇瓶发酵表达量怎么样？

[ Last edited by susizheng on 2010-8-1 at 13:00 ]
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Thank-you，so-blue.
4楼2010-08-01 12:57:14
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★
amisking(金币+1):人家又提问了哦 2010-07-31 23:39:18
SMD1168只是蛋白酶缺陷型菌株，操作应该和GS115没什么区别。
诱导后不需要补加甘油。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-07-31 15:31:03
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嘉笛

木虫 (小有名气)
amisking:建议引用一下，不然对方看不到你的信问题。 2010-07-31 23:39:37
可是我看有的文献说诱导后也要补加甘油的啊？难道跟表达的蛋白有关？susizheng 有这方面详细的参考资料或操作手册吗？我现在做这个的发酵，是先用YPD摇种子，然后用含有甘油和0.5%甲醇的培养基培养大概48h后加大甲醇浓度至1%。可是蛋白表达量一直很低，请问这样做有问题吗？望高手不吝赐教！
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3楼2010-07-31 23:03:38
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