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续
15.1.2成品质量标准（草案）
【处方】
【制法】以上十七味，除芒硝外，天花粉、白芷粉碎成细粉，过筛，混匀，其余大黄等十四位，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次、第三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.30（50℃）的清膏，将芒硝粉碎，加入清膏中，搅匀，浓缩至相对密度1.35（50℃）的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，即得。
【性状】 本品为胶囊剂，内容物为黄褐色的粉末；气腥，味苦涩。
【鉴别】 （1）取本品内容物约5g，加氯仿25ml，浓盐酸1ml，置水浴上加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1g，加氯仿10ml，盐酸1ml,同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）
-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，
晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
（2）取本品内容物约1g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材1g，加甲醇10ml，同法制层对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应的位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。
【检查】 应符合胶囊剂项下有关的各项规定（《中国药典》2000年版一部附录ⅠL）。
【含量测定】照高效液相色谱法（《中国药典》2000年版一部附录Ⅵ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－０.１％磷酸（75：25）为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥至恒重的大黄酚适量，加甲醇使溶解，制成每1ml含0.08mg的溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 取本品内容物约1g，精密称定，加甲醇30ml超声30分钟，过滤，挥干甲醇，加氯仿25ml溶解，加浓盐酸1ml，置水浴上回流30分钟，放冷，过滤，挥干氯仿，残渣用甲醇溶解并定容为25ml作为供试品溶液。
测定法 分别取对照品和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含大黄酚（C15H10O4）以干燥品计，不得少于0.200mg。
【功能主治】
【用法用量】口服，一次5粒，一日4次。
【禁 忌】孕妇忌服。
【规 格】每粒装0.5g
【贮 藏】密封。
15.2 质量标准修订说明
【名称】同原标准（指《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第十 册》，下同），即：
名称：
汉语拼音：
【处方】同原标准，即：
【制法】同原标准，即：
以上十七味，除芒硝外，天花粉、白芷粉碎成细粉，过筛，混匀，其余大黄等十四位，加水煎煮三次，第一次2小时，第二次、第三次各1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.30（50℃）的清膏，将芒硝粉碎，加入清膏中，搅匀，浓缩至相对密度1.35（50℃）的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，装入胶囊，即得。
【性状】 同原标准，即：
本品为胶囊剂，内容物为黄褐色的粉末；气腥，味苦涩。
表1、性状观察结果
供试品批号 性状
20031101 内容物为黄褐色的粉末；气腥，味苦涩。
20031102 内容物为黄褐色的粉末；气腥，味苦涩。
20031103 内容物为黄褐色的粉末；气腥，味苦涩。
根据3批样品的性状观察，结果均符合规定。
【鉴别】 同原标准，即：
（1）取本品内容物约5g，加氯仿25ml，浓盐酸1ml，置水浴上加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液置水浴上浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取大黄对照药材1g，加氯仿10ml，盐酸1ml,同法制成对照药材溶液，照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）
-甲酸乙酯-甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，
晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
附紫外光下色谱示意图：鉴别（1）薄层层析色谱图
注：1、供试品溶液（批号20031101） 2、供试品溶液（批号20031102）
3、供试品溶液（批号20031103） 4、大黄对照药材
（2）取本品内容物约1g，加甲醇5ml，超声处理5分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取黄柏对照药材1g，加甲醇10ml，同法制层对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述两种溶液各5ul,分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇-冰醋酸-水（7：1：2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在于对照药材相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；在与对照品色谱相应位置上，显相同的一个黄色荧光斑点。
附紫外光下色谱示意图：鉴别（2）薄层层析色谱图
注：1、供试品溶液（批号20031101） 2、供试品溶液（批号20031102）
3、供试品溶液（批号20031103） 4、黄柏对照药材
5、盐酸小檗碱对照品
【检查】 同原标准，即：
应符合胶囊剂项下有关的各项规定（附录ⅠL）。
表2，检查情况结果：
检查项目 20031101批 20031102批 20031103批
水分 7.8% 8.1% 8.0%
装量差异 0.464～0.538g 0.470～0.541g 0.473～0.531g
崩解时限 14分钟 15分钟 14分钟
细菌总数 50个/g 60个/g 40个/g
霉菌及酵母菌总数 <10个/g <10个/g <10个/g
大肠杆菌及活螨 未检出 未检出 未检出
【含量测定】原标准无含量测定方法，新建高效液相色谱含量测定方法，即：
照高效液相色谱法（《中国药典》2000年版一部附录Ⅵ D）测定。
色谱条件与系统适用性试验 用辛基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇－０.１％磷酸（80：20）为流动相；流速为每分钟1ml；检测波长为254nm。理论板数按大黄酚峰计算应不低于3000。
对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥（减压至16mmHg后室温放置24小时）至恒重的大黄酚适量，加甲醇使溶解，制成每1ml含0.08mg的溶液作为对照品溶液。
供试品溶液的制备 取本品内容物约1g，精密称定，加甲醇30ml超声30分钟，过滤，挥干甲醇，加氯仿25ml,加浓盐酸1ml，置水浴上回流提取30分钟，放冷，过滤，挥干氯仿，残渣用甲醇溶解并定容为25ml作为供试品溶液。
测定法 分别取对照品和供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每粒含大黄酚（C15H10O4）以干燥品计，不得少于0.200mg。
★由于本方法为新建，故本处列出方法学考察的情况，具体试验说明如下：
1、实验仪器与材料：
Agilent 1100 高效液相色谱仪
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8分析柱（150mm×4.6mm,5um）
METTLER TOLEDO AG135 十万分之一天平
大黄酚对照品（中国药品生物制品检定所提供）
样品（ 有限公司提供）
磷酸（分析纯）
一般用途甲醇为分析纯，流动相用甲醇为色谱纯，水为重蒸水。
2、提取条件的选择
根据《中国药典》（2000年版一部）"大黄"药材含量测定的样品处理方法，并结合加样回收率试验考察，最终确定的样品处理方法为：
取本品内容物约1g，精密称定，加甲醇30ml，超声30分钟，过滤，挥干甲醇，加氯仿25ml,加浓盐酸1ml，置水浴上回流提取30分钟，放冷，过滤，挥干氯仿，残渣用甲醇溶解并定容为25ml作为供试品溶液。
3、色谱条件的确定
通过查阅各种药学资料及中国药典（2000年版）关于"大黄"药材的含量测定方法，我们对流动相进行筛选，最终确定的色谱条件如下：
色谱柱：Agilent Eclipse XDB-C8分析柱（150mm×4.6mm,5um）
检测波长：254nm
流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（75：25）
流速：lml/分钟
柱温：室温
大黄酚对照品图谱
样品
阴性对照品
在该色谱条件下，对照品峰形良好，样品相应保留时间的峰形和分离度均良好，阴性对照品在相应保留时间无吸收，说明该色谱条件符合专属性的要求。
4、对照品溶液的制备
精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥（减压至16mmHg后室温放置24小时）至恒重的大黄酚适量，加甲醇使溶解，制成每1ml含0.08mg的溶液作为对照品溶液。
5、线性关系试验
5.1实验方法
精密称取经五氧化二磷容器中减压干燥（减压至16mmHg后室温放置24小时）至恒重的对照品大黄酚2.5mg，用甲醇定容至25ml容量瓶中，配成100ug/ml的对照品储备液，吸取储备液稀释制成浓度为40ug/ml,5ug/ml的对照品溶液。按上述色谱条件，进样，测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品进样量为横坐标，绘制标准曲线。
5.2 线性关系结果
序 号 标准品浓度 进样体积 进样量(10-3ug) 峰面积
1 5ug/ml 4ul 20 114.72 40ug/ml 2ul 80 432.13 100ug/ml 6ul 600 3262.54 100ug/ml 14ul 1400 7574.65 100ug/ml 25ul 2500 13472.2
以上数据，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标进行线性回归，回归方程如下：
回归方程：y = 5.3884x + 13.856
相关系数r= 0.9999
检出线性范围：2×10-2 ug～2.5ug
6、检出限的确定
6.1实验方法
将色谱工作站检测仪的灵敏度调高，用1:10倍比稀释处理的系列对照品溶液及空白溶剂进样，进样量为10ul,考察对照品与噪声强度之间的关系，以信噪比为3时确定检出限。
6.2试验结果
通过实验，可以确定上述图谱为最低检出限图谱，该HPLC法大黄酚含量测定的最低检出限为1ng.
7、精密度试验
7.1 实验方法
取大黄酚对照品溶液（每1ml含大黄酚0.04mg）及供试品溶液（批号为20031101），分次进样（进样量均为10μl）各5次，记录峰面积值。
7.2精密度结果
序号 大黄酚对照品峰面积 供试品中大黄酚峰面积
1 2180.3 2651.1
2 2183.8 2654.5
3 2179.3 2658.3
4 2188.2 2655.4
5 2176.7 2647.3
平均值 2182.3 2653.3
RSD% 0.20% 0.16%
8、重现性试验
8.1 实验方法
取本品（批号为20031101），混匀，精密称取5份，每份1.0g，按上述拟定的含量测定方法测定大黄酚的含量。
8.2 重现性结果（含量，mg/g n=2）
序号 1 2 3 4 5 平均值 RSD%
含量 0.486 0.488 0.487 0.484 0.486 0.486 0.3%
9、加样回收率试验
9.1 实验方法
分别精密称取已知含量的样品（批号20031101，含大黄酚0.486mg/g）1.0g，置锥形瓶中，各精密加入大黄酚对照品溶液（每1ml含0.10mg的溶液）1ml、2ml、3ml，4ml，5ml，挥干甲醇，按样品含量测定方法处理分析，计算加样回收率。
9.2 加样回收率结果
取样量（g） 样品中大黄酚含量（mg） 大黄酚加入量（mg） 大黄酚总测得量（mg） 大黄酚回收量（mg） 回收率（%）
1.001 0.486 0.1 0.584 0.098 98.00
1.005 0.488 0.2 0.684 0.198 99.00
1.003 0.487 0.3 0.786 0.299 99.67
1.008 0.490 0.4 0.885 0.395 98.75
1.000 0.486 0.5 0.982 0.496 99.20
平均回收率：98.9 %；变异系数：0.62 %
以大黄酚回收量为纵坐标，大黄酚加入量为横坐标进行线性回归，得线性方程：
回归方程Y=0.993x-0.0007 相关系数r=0.9999
10、稳定性实验
10.1 实验方法
取同一（20031101批）供试品溶液，按上文拟定的含量测定条件，每隔2小时进样10μl，测定大黄酚含量。
10.2稳定性考查结果
序号 1 2 3 4 5 平均值 RSD%
峰面积 2661.4 2657.3 2653.1 2651.2 2659.9 2656.6 0.16%
实验证明：供试品的甲醇提取液中的大黄酚在10小时内是稳定的。
11、样品含量测定
11.1 实验方法
精密称取不同批次的本品1.0g，照含量测定方法提取、测定大黄酚含量。
11.2 含量测定结果（mg/粒，n=2）
批号 20031101 20031102 20031103 平均值
含量 0.243 0.245 0. 241 0.243
结论：通过以上方法学的验证结果表明，用上述高效液相色谱条件测定中的大黄酚含量是专属、准确、可行的。通过对3个批次的含量测定结果表明，制剂中大黄酚平均含量为0.243mg/粒，根据通用含量限度确定方法（±15%），确定本品的含量限度不得低于0.200 mg/粒。
【功能主治】同原标准，即：
"
【用法用量】口服，一次5粒，一日4次。"
【禁 忌】同原标准，即：
"孕妇忌服。"
【规 格】同原标准，即：
"每粒装0.5g"
【贮 藏】同原标准，即：
"密封。"
【有 效 期】新增：
按加速稳定性试验结果，拟定有效期二年。
参考文献：
（1）《中国药典》(2000年版)一部、二部
16、样品及检验报告书：
样品：随材料附上，三批计480粒。
检验报告书见附页。
，具体标准参见GB5663-1985。 |
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