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luohuan_llt

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】急知原因,急 已有13人参与

我做HPLC,需要流动相是:CH3OH-K2HPO4水溶液=90:10
pH值要调到5-6之间。未调节前pH是10.41,我用H3PO4调节,但在滴加过程中慢慢变浑浊,出现絮状白色沉淀,是什么原因,我该如何去调节pH值?
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qiujm

木虫 (小有名气)

luohuan_llt(金币+2): 2010-07-28 09:53:17
应该是先配缓冲液,在按比例加甲醇,另外缓冲盐浓度不要太高

[ Last edited by qiujm on 2010-7-27 at 16:41 ]
3楼2010-07-27 16:39:41
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jiusjiu

木虫 (正式写手)


luohuan_llt(金币+4): 2010-07-28 09:53:09
有机相浓度太高啦,非要这么强洗脱条件的话
为什么不尝试用60%-80%乙腈试一试?
另外也有可能是你的盐浓度,一般在50mM以下

[ Last edited by jiusjiu on 2010-7-27 at 16:40 ]
2楼2010-07-27 16:38:17
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luohuan_llt

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by luohuan_llt at 2010-07-27 16:30:55:
我做HPLC,需要流动相是:CH3OH-K2HPO4水溶液=90:10
pH值要调到5-6之间。未调节前pH是10.41,我用H3PO4调节,但在滴加过程中慢慢变浑浊,出现絮状白色沉淀,是什么原因,我该如何去调节pH值?

我用了80%乙腈-20%的0.02molK2HPO4,我搅拌混匀时就开始浑浊了,但随着我滴加H3PO4,溶液开始变澄清,此时pH值在4.6左右,但随后30min后又有少量的絮状沉淀析出。
K2PO4在pH8左右就开始析出了,难道C18柱就不能用K2PO4做缓冲盐溶液了吗?
衣带渐宽终不悔 为伊消得人憔悴
4楼2010-07-28 15:25:35
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maxuedong

至尊木虫 (著名写手)

小木虫终身顾问

应该是先配缓冲液,而且有机相浓度太高.
即使常压下不浑浊,也难保在高压下不浑浊。
建议调整比例或使用甲醇水系统
平平淡淡才是真
5楼2010-07-28 15:36:11
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