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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】茚三酮法测氨基酸含量,虫虫们，HELP!
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蓝鲸_lanjing

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】茚三酮法测氨基酸含量,虫虫们，HELP! 已有12人参与

看了一篇硕士论文的附录，说是游离氨基酸用茚三酮法来测。但是他的溶液配制我有点想不明白。请大家帮我看看这么做行不行。

（1）水合茚三酮试剂:取0.6g茚三酮置于烧杯中,加15mL正丙醇溶解,再加30 mL正丁醇,60mL乙二醇,最后加入9mL pH5.4,0.2mol/L的醋酸盐缓冲液。（这个液体总量是114ml，这是什么比例啊？)

（2）标准亮氨酸：取亮氨酸46.8 mg,溶于10%异丙醇溶液中，并定容至100mL(10%异丙醇用pH5.4，0.2M醋酸盐缓冲液配制)。取5mL稀释液，再用pH5.4醋酸盐缓冲液定容到50mL，此即为含氮为5mg/L的标准液；(这个计算我不是太明白，怎么46.8mg溶于总量100ml的液体再稀释10倍就变成5mg/L的标准液了？应该是46.8mg/L啊。)

（3）0.3%抗坏血酸溶液:取0.3g抗坏血酸溶于100mL蒸馏水中，现用现配。

标准曲线：
                                                      试剂管号
                                       1        2        3          4        5         6
标准亮氨酸（mL）          0      0.2      0.4      0.6     0.8      1.0
pH5.4缓冲液（mL）       2.0    1.8       1.6      1.4     1.2     1.0
水合茚三酮（mL）         3.0     3.0      3.0      3.0      3.0      3.0
0.3%抗坏血酸（mL）     0.1     0.1      0.1      0.1      0.1     0.1
每管含氮量（μg）           0       1          2         3         4          5
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1楼 2010-07-26 17:25:25
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蓝鲸_lanjing

铁虫 (初入文坛)
呃，有没有人啊？
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2楼2010-07-27 09:38:39
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刘小乐

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
表示不晓得，还是顶一下新虫吧~~
赞一下(1人) 回复此楼
互动互利互相学习
3楼2010-07-27 11:24:02
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赖赖smile

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也想问同样的问题~不知道你已经知道否？？？
做论文急啊！谢谢了啊！
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4楼2011-03-13 12:10:22
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简中勇

铜虫 (小有名气)

数学问题

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2): 新虫，鼓励下 2011-03-15 12:29:04
亮氨酸相对分子质量为131.17   N约为14 。  46.8mg/L是亮氨酸的浓度啊！你将他转化为N 的浓度就可以了啊    N浓度约为5.00mg/L 。
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5楼2011-03-14 23:30:04
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hyy2005bne

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看不太懂。我测赖氨酸的含量，是显色剂用的是溶于水的0.5%茚三酮，做的标准曲线。
楼主也可以查查其他的方法
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6楼2011-04-01 17:06:24
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lx7225922

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我看见的一种方法是加茚三酮和抗坏血酸，不知道加抗坏血酸的作用是什么
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7楼2012-05-23 08:56:29
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lordsidious

铁杆木虫 (知名作家)

Dark Lord of the Sith
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
抗坏血酸是用来还原茚三酮的，一分子氨基酸是和两分子茚三酮反应，其中一个分子是还原型的。本来是靠氨基酸脱氨来还原，但是估计这个反应太慢，等不了，得加点还原剂加速一下。我今天做的时候根本不变色，滴了20微升进去立竿见影。当然我的反应体系比较小而已。
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May the Force be with you.
8楼2012-09-12 19:56:36
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chshen06188

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
814362楼: Originally posted by 蓝鲸_lanjing at 2010-07-26 17:25:25
看了一篇硕士论文的附录，说是游离氨基酸用茚三酮法来测。但是他的溶液配制我有点想不明白。请大家帮我看看这么做行不行。

（1）水合茚三酮试剂:取0.6g茚三酮置于烧杯中,加15mL正丙醇溶解,再加30 mL正丁醇,60mL乙 ...

"含氮为5mg/L的标准液",看清楚了，是含氮量，亮氨酸的含氮量是10.687%。
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竹杖芒鞋轻胜马，一蓑风雨任平生。
9楼2012-09-24 14:23:00
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小丑鱼vivid

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhangxingc: 金币+4, 鼓励新虫发帖，欢迎常到微生物版 2013-04-26 09:07:58
引用回帖:
8楼: Originally posted by lordsidious at 2012-09-12 19:56:36
抗坏血酸是用来还原茚三酮的，一分子氨基酸是和两分子茚三酮反应，其中一个分子是还原型的。本来是靠氨基酸脱氨来还原，但是估计这个反应太慢，等不了，得加点还原剂加速一下。我今天做的时候根本不变色，滴了20微升 ...

请问一下，我测定氨基酸含量时，茚三酮溶液的配制是用茚三酮和还原型茚三酮混合配置的，还原茚三酮是用茚三酮加抗坏血酸，然后滤去沉淀物真空干燥得到的，但是真空干燥时间很长，有没有什么简单的方法？
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10楼2013-04-26 07:58:35
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