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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散
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hdxudeduo

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】重叠延伸pcr第二轮条带较弱，弥散 已有11人参与

最近做重叠延伸点突变，第一轮pcr两个条带都很好，第二轮连接两段，同样的条件，目的带很弱，且整个泳道弥散，我照着目的条带切下回收，想做二次pcr增大产物量，可是怎么也p不出来，模板的量从1/500到5倍都试过了，不行，不知道什么原因。酶和引物都没问题
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1楼 2010-07-25 16:12:20
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实验white

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by hdxudeduo at 2011-10-08 12:12:56
去年的帖子，现在做个完结。
那时候再怎么改条件，以重叠延伸后的产物做模板都P不出来，但实验得往下走，就直接进行了酶切，和载体进行连接，克隆，还真可以。
开始担心重叠延伸后的产物量少，看来是多余的。
至 ...

楼主，你好，我想请问下，做重叠pcr条带弥散的话，胶回收、连接载体往下做没有问题吗？

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13楼2018-07-03 10:40:32
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
体系变一变，每一次做的时候把条件都换一换~
祝好运！
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
2楼2010-07-25 17:53:46
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xp198766

铁杆木虫 (著名写手)

小木虫职业打酱油滴~~！
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):欢迎交流~~ 2010-07-25 19:59:28
第二次PCR，条带不清晰，要看看是不是你的目的了，看看是不是哪里出了问题，还有你第一次是不是真的P出来了，这些都考虑一下……上面说的对，把能换新的的，都换新的再试试……
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-07-25 18:32:46
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sunyongle1

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
估计你就是没连上，看看引物是不是设计反了？或者重合的bp数太少了
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5楼2010-07-25 19:43:05
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