| 查看: 4679 | 回复: 41 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
maggie3277木虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带 已有22人参与
|
||
| 请教各位虫友，最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带，IPTG诱导浓度也设置了梯度，温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况，构建好的质粒却表达不出条带的情况吗？ |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有129人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
chemifunan
木虫 (正式写手)
海王小木虫
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2816.9
- 帖子: 393
- 在线: 11.4小时
- 虫号: 235785
- 注册: 2006-04-01
- 性别: GG
- 专业: 神经生物学
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
|
不是吧 楼主 37个还不多啊 很多了 你把你现在的载体转到RocettaBL21里表达看看 km50再加cm25 37度先试试 另外28楼的同学 表达不表达是看基因的来源是不适合大肠杆菌 是否包涵体是看折叠过程是否正常 这是对soluble蛋白 膜蛋白比较特殊 即使折叠正确也会沉淀 膜蛋白是大肠来源的同源高表达最好做 表达完了会附着在自己的膜上 高速离心分离 如果其他来源的 会直接是包涵体 把包涵体分出来 溶在相应的detergent溶液里就好了 N端保守型高一点 通常N端折叠不正常会导致整个蛋白表达效果失败 看楼主的基因是什么来源了 有些基因表达后在宿主内有后修饰 大肠不具备就不会很好表达 现今策略 试试pMAL等融合载体 再就是原有载体换个菌种 用rocetta看看 另外问一下 楼主你的基因是完整的基因还是truncated的基因 |
30楼2010-07-28 18:45:32
小白3521
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 690.8
- 散金: 218
- 帖子: 251
- 在线: 73.8小时
- 虫号: 769519
- 注册: 2009-05-13
- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2010-07-23 23:28:47
lwiaanngg
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.773
- 金币: 7403.2
- 散金: 24
- 红花: 12
- 帖子: 1211
- 在线: 110.3小时
- 虫号: 43541
- 注册: 2004-04-10
- 专业: 应用高分子化学与物理
3楼2010-07-24 00:11:56
sunyongle1
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2638.8
- 散金: 1
- 帖子: 413
- 在线: 103.8小时
- 虫号: 1059232
- 注册: 2010-07-17
- 专业: 肿瘤发生
4楼2010-07-24 08:04:55