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maggie3277木虫 (小有名气)
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[交流]
【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带 已有22人参与
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| 请教各位虫友，最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带，IPTG诱导浓度也设置了梯度，温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况，构建好的质粒却表达不出条带的情况吗？ |
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chemifunan
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不是吧 楼主 37个还不多啊 很多了 你把你现在的载体转到RocettaBL21里表达看看 km50再加cm25 37度先试试 另外28楼的同学 表达不表达是看基因的来源是不适合大肠杆菌 是否包涵体是看折叠过程是否正常 这是对soluble蛋白 膜蛋白比较特殊 即使折叠正确也会沉淀 膜蛋白是大肠来源的同源高表达最好做 表达完了会附着在自己的膜上 高速离心分离 如果其他来源的 会直接是包涵体 把包涵体分出来 溶在相应的detergent溶液里就好了 N端保守型高一点 通常N端折叠不正常会导致整个蛋白表达效果失败 看楼主的基因是什么来源了 有些基因表达后在宿主内有后修饰 大肠不具备就不会很好表达 现今策略 试试pMAL等融合载体 再就是原有载体换个菌种 用rocetta看看 另外问一下 楼主你的基因是完整的基因还是truncated的基因 |
30楼2010-07-28 18:45:32
小白3521
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3楼2010-07-24 00:11:56
sunyongle1
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