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maggie3277

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白诱导表达不出目标条带 已有22人参与

请教各位虫友,最近做重组蛋白的表达。但在大肠杆菌内重组的pet28a总表达不出我的目标条带,IPTG诱导浓度也设置了梯度,温度也设定了梯度。但就是没有我的目标条带的生成。请问有虫友遇到过类似情况,构建好的质粒却表达不出条带的情况吗?
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maggie3277

木虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by noheartman at 2010-07-27 21:58:57:
构建好的表达载体在大肠杆菌中不一定会表达的,就算你优化表达时间,IPTG的浓度或其他的,我做的是膜蛋白,pET28a就不怎么表达,或者以包涵体的形式表达。你可以试着进行一些N末端的修饰,看看有没有一定的效果。 ...

再不行的话,真的要换载体了,我要抓狂了。
29楼2010-07-28 09:29:48
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小白3521

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-07-23 23:53:32
测序正确吗?或者换一种表达菌株试一试看
2楼2010-07-23 23:28:47
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lwiaanngg

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-07-24 06:18:43
LS说的对,你测序结果好么?
我一直不太喜欢28,更喜欢30点,呵呵
3楼2010-07-24 00:11:56
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sunyongle1

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢分享经验~~ 2010-07-24 12:45:46
我也遇到过一次,而且片段不是很长的那种。原来我用全长序列倒是表达出来了,只是量很低。后来就用了部分片段,没想到,就没有了。也不知道什么原因。
建议:首先保证测序正确(其实只要不发生移码突变之类,也应该表达出来啊);你的序列是不是有稀有密码子;你的序列疏水区,信号肽,跨膜域这些都会影响表达;蛋白很大的话,也会影响它的表达。
不知道楼主是用来干什么呢?制备抗原,分析酶活?
4楼2010-07-24 08:04:55
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