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【求助】mPEG-mal,mPEG-COOH 已有5人参与
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mPEG-mal,mPEG-COOH 两者都可以与带有赖氨酸的小肽偶合吗？ 还是直接与小肽的NH2末端偶联的？ 非常感谢！ |
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2楼2010-07-19 18:47:16
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蜗牛VS蜗牛(金币+10):谢谢 2010-07-20 17:41:53
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楼上两位基本上都说了，那我再补充几点： 1、COOH与NH2的反应比Mal与SH的反应要慢的多，前者往往需要12-24小时以后，后者只需要1-3小时，就是Mal体系的一个优点。 因此，前一个反应较慢。 2、COOH与NH2的反应需要催化剂，一般是用EDC或EDC+NHS(sulfo)，在用EDC活化以后，产生的中间体是一个酰基脲，这个结构容易参与亲核反应，比如NH2、SH、H2O都会与它反应，因为它的副反应比较多。另外，在于NH2反应后，另外一个副产物是脲。 因此，这个反应副反应较多，且有副产物，可能需要除去。 3、因为很多蛋白或者多肽中都是同时含有COOH与NH2的，所以用EDC体系有可能会导致蛋白与多肽之间或者自身的反应。 另外，因为蛋白是有活性位点的，有些极端情况下会影响蛋白的活性。 因此，很多人在合成多肽时会在末端加入一个（半）肽氨酸，或者在构建抗体序列时加入一段含SH的序列。 4、NH2变成SH。用SPDP的话，还有一步就是用DTT或者其他还原性物质把S-S键断裂反应SH，再与Mal反应，这样比较麻烦，而且还原物质或者除不彻底，会影响SH与Mal的反应。 可以尝试用iminothiolane，一步反应，比较方便。 另外，用SH与Mal的反应还有一个优点，就是比较容易跟踪反应进行的程度，好像是用DTNB。 以上就是二者的区别，但其实看文献的话，有非常多的人用COOH与NH2的反应接蛋白或者多肽，你可以试一下，只要反应效率还可以，有活性就可以继续往下做。 |
7楼2010-07-20 15:35:37
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