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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】microRNA 颈环PCR求助
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000zgh000

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】microRNA 颈环PCR求助已有5人参与

请问哪位大侠做过microRNA的茎环RT-PCR，跑出来的带应该是什么样的？小弟做了好几次都没有p出来，不知道是什么缘故？
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1楼2010-07-12 14:51:30
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wangcheng2650

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-07-13 01:05:25
我们以前经常做，长度大概在80-100bp之间吧！
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日子是混出来的！
2楼2010-07-12 23:11:10
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000zgh000

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wangcheng2650 at 2010-07-12 23:11:10:
我们以前经常做，长度大概在80-100bp之间吧！

请问你们是自己设计的引物还是买的公司的引物？
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3楼2010-07-13 22:01:08
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wangcheng2650

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
[quote]Originally posted by 000zgh000 at 2010-07-13 22:01:08:

请问你们是自己设计的引物还是买的公司的引物？ [/quo

有自己设计的，也有从ABI公司买的试剂盒
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日子是混出来的！
4楼2010-07-13 23:24:53
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000zgh000

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wangcheng2650 at 2010-07-13 23:24:53:
[quote]Originally posted by 000zgh000 at 2010-07-13 22:01:08:

请问你们是自己设计的引物还是买的公司的引物？ [/quo

有自己设计的，也有从ABI公司买的试剂盒

你们做过microRNA-122吗，我设计了几条引物p出来都在200-300之间，一直不成功，急着毕业，愁死啦，老板也不舍得花钱，如果你做过microRNA-122的茎环PCR且有比较理想的引物或者试剂盒，我可以拿实验室的资源和你交换，非常感谢，急盼回复。手机：13055675266   QQ：383266936
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5楼2010-07-14 22:09:45
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wangcheng2650

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+2):谢谢参与 2011-01-06 12:18:33
直接从ABI公司订购就可以，不知道你实验的最终目的，miR-122是肝脏特异性的，P不出来不一定是你的引物设计问题。
引用回帖:
Originally posted by 000zgh000 at 2010-07-14 22:09:45:

你们做过microRNA-122吗，我设计了几条引物p出来都在200-300之间，一直不成功，急着毕业，愁死啦，老板也不舍得花钱，如果你做过microRNA-122的茎环PCR且有比较理想的引物或者试剂盒，我可以拿实验室的资源和你 ...

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6楼2010-07-15 14:11:11
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000zgh000

新虫 (小有名气)
★
silicare(金币+1):鼓励交流 2011-01-06 12:18:54
引用回帖:
Originally posted by wangcheng2650 at 2010-07-15 14:11:11:
直接从ABI公司订购就可以，不知道你实验的最终目的，miR-122是肝脏特异性的，P不出来不一定是你的引物设计问题。

我先拿设计好的引物用从肝细胞中提取的总RNA进行PCR，看看引物能不能用，结果P出来的带在200多，不是我想要的带，ABI订购大约多少钱，估计得5000多吧？
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7楼2010-07-15 16:59:59
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wangcheng2650

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):鼓励交流 2011-01-06 12:19:11
要不了那么多，估计最多也就3000左右吧，不过你还得订个内参什么的，加起来估计5000多吧，其实你要是用荧光染料的话一支也得2000多，便宜不了多少！你要是自己不会设计的话，可以让公司帮你设计引物，现在好多公司都可以自己设计microRNA引物的，可能会便宜点。
引用回帖:
Originally posted by 000zgh000 at 2010-07-15 16:59:59:

我先拿设计好的引物用从肝细胞中提取的总RNA进行PCR，看看引物能不能用，结果P出来的带在200多，不是我想要的带，ABI订购大约多少钱，估计得5000多吧？

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8楼2010-07-15 20:54:12
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zhujiumei

木虫 (著名写手)
送上最诚挚的祝福！
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9楼2011-01-06 12:07:46
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amilie030312

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
ABI的是全套的试剂盒，但他们家的都是定量的试剂啊，你还跑胶看啥啊？而且不同的nicroRNA接上他们家的接头之后长度就不固定了，他们的逆转录引物也是特意的，而且不公布，所以不知道大小，也没办法跑胶鉴定啊。自己设计的话就知道大概的长度才可以跑胶呢。
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10楼2011-01-06 13:14:21
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