| 查看: 5078 | 回复: 33 | ||||||
[交流]
【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法 已有33人参与
|
|
1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法； 2. 可能模板有问题； 3. 模板浓度过小，适当加大模板量； 4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度； 5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的； 6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性； 7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。 8. 增加循环数； 9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）； 10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。 11. 以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50-100倍 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 我喜欢的精华帖 | 1234 | 七夜 菁华 |
» 猜你喜欢
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有230人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 相同条件的pcr产物，跑出不同的条带，是什么原因[/img][/img][/img]
已经有12人回复
- 【求助/交流】PCR引物二聚体问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】pcr反应目的条带很浅，引物二聚体很亮
已经有33人回复
- 【分享】提高PCR特异性的方法
已经有10人回复
- 【求助】PCR退火温度及时间如何确定
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR 的原理是啥啊
已经有20人回复
- 【专题】PCR实验技术指南
已经有535人回复
zhaohq1209
铁杆木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.034
- 金币: 10666.7
- 散金: 587
- 红花: 12
- 帖子: 2113
- 在线: 333.7小时
- 虫号: 243823
- 注册: 2006-04-15
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
2楼2010-07-12 11:04:33
| 谢谢分享~~ |
3楼2010-07-12 11:05:18
ydniu
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 14056.6
- 帖子: 788
- 在线: 102.6小时
- 虫号: 963895
- 注册: 2010-03-07
- 专业: 作物种质资源与遗传育种学
4楼2010-07-12 11:48:30
ymzfeng
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 831.2
- 散金: 15
- 帖子: 143
- 在线: 33.8小时
- 虫号: 858322
- 注册: 2009-09-27
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
5楼2010-07-12 13:34:44
6楼2010-07-12 14:19:34
darcy2010
铜虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2031.4
- 帖子: 371
- 在线: 74.7小时
- 虫号: 1053033
- 注册: 2010-07-06
- 性别: GG
- 专业: 植物病理学
7楼2010-07-12 14:34:37
qiangfeng
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1623.8
- 红花: 1
- 帖子: 271
- 在线: 170.7小时
- 虫号: 722794
- 注册: 2009-03-14
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
8楼2010-07-12 14:48:44
zzup
金虫 (初入文坛)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1219.1
- 散金: 9
- 帖子: 44
- 在线: 16.6小时
- 虫号: 1038257
- 注册: 2010-06-08
- 专业: 微生物生理与生物化学
9楼2010-07-12 15:01:42
10楼2010-07-19 15:12:30
20