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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法
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呆米11

金虫 (小有名气)

[交流] 【分享】PCR产物中减少引物二聚体的方法 已有33人参与

1. 从引物自身着手，重新设计引物，这是最根本解决这一问题的办法；
2. 可能模板有问题；
3. 模板浓度过小，适当加大模板量；
4. Taq酶，引物，Mg2+浓度可能过高，可降低它们的浓度；
5. 取你所要加的上下游引物混合后，在100摄氏度下的沸水中煮5分钟，然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却，这时再加入反应体系当中，引物二聚体就会消失的；
6. 所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO，可以增强特异性；
7. PCR反应体系的配制在冰上进行，最后加TAq酶，PCR结束后，产物勿放置在室温下过长时间，有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体。
8. 增加循环数；
9. 降低退火温度后有条带，则应逐渐提高温度，若提高温度的同时产物量减少，则考虑增加镁离子浓度（根据扩增片断长度而定，片段长则相应镁离子浓度应该高一些）；
10. 若降低退火温度，发现还是只有引物二聚体，而且镁离子的浓度在 20-25mmol/l没有区别，则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀，导致吸取的试剂浓度不对。
11. 以上次的pcr产物作模板二次pcr，可以提高引物与模板的特异性，减少引物二聚体，如果两次时间间隔短的话，可以把原产物稀释100－1000倍，如果间隔较长可以稀释50-100倍
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1楼 2010-07-12 10:11:50
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zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
嗯，真不错
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我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
2楼2010-07-12 11:04:33
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windybeyond
谢谢分享~~
3楼2010-07-12 11:05:18
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ydniu

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
不错，谢谢分享
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4楼2010-07-12 11:48:30
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ymzfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
好
不错
谢谢分享
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5楼2010-07-12 13:34:44
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jdz19861029

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
厉害，谢谢分享
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6楼2010-07-12 14:19:34
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darcy2010

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
总结得不错，谢谢分享！
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Don'tletanyoneputfareintoyou!
7楼2010-07-12 14:34:37
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qiangfeng

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
为什么一定要减少引物二聚体呢？
只要不影响实验结果就行 嘛。。。
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顺势而行，问心无愧！
8楼2010-07-12 14:48:44
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zzup

金虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
顶一个
谢谢分享
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9楼2010-07-12 15:01:42
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bring_2006

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
获益良多
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10楼2010-07-19 15:12:30
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