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jinling158铜虫 (小有名气)
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【求助/交流】相对定量可以不做标准曲线吗 已有3人参与
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本人想做real time PCR, 做测试菌株和参照菌株之间A基因的表达差异，看了很多资料之后，觉得没有必要做标准曲线，原因如下： 目前主要用两种方法进行相对定量，其中之一是2－△△Ct法，该法前提是目的基因和参照基因有相同的扩增效率且接近100%；我认为用这种方法需要做标准曲线来看一下目的基因和参照基因的扩增效率是否相同。 另外一种方法是Pfaffl法，这种方法应用的前提是单个基因（目的基因和参照基因）在试验样本和标准样本中有相同的扩增效率，但不要求目的基因和参照基因有相同的扩增效率。但是用这种方法要知道目的基因和参照基因的扩增效率，请问一下做过的同学，如果不做标准曲线的话怎么知道目的基因和参照基因的扩增效率呢？另外，怎么确定单个基因在不同样本之间具有相同的扩增效率呢？ 希望做过的童鞋发表一下您的高见，谢谢！ [ Last edited by jinling158 on 2010-7-2 at 17:37 ] |
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