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lanlan1119

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助】使用一根新柱子出现的情况,请高手帮忙!已有12人参与

昨天刚拆开了一根新柱子,用纯甲醇1ml/min的流速冲洗了半小时。今天做样的时候发现了一个很奇怪的问题,最开始早上的出峰时间是35min,到下午5点的时候已经是25min了而且每一针的时间还在往前提。这期间室温和柱温都是恒定的,不知道问题出在哪里了?请高手指点
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forging

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能你柱子活化时间不够,你在重新活化一下吧
2楼2010-06-25 17:02:39
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

zxz.1982:如果你进的是标准溶液,有鼓起我觉得应该是你柱子里面未被键合上填料下来了,或者是系统里面的脏东西出来了,不建议用纯甲醇或纯水去冲洗柱子,否则损耗很大的 2010-06-26 11:12:54
引用回帖:
Originally posted by forging at 2010-06-25 17:02:39:
可能你柱子活化时间不够,你在重新活化一下吧

还得用甲醇长时间的冲洗吗?
而且不只是出峰时间越来越靠前,峰型也越来越不好看,拖尾的同时,在峰高一半的时候还鼓起,随着时间的延长,鼓起的那块越来越明显。流动相就是0.05M的磷酸氢二钠:甲醇=85:15。不会对柱子影响那么大吧!!!
3楼2010-06-25 17:23:03
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

没人遇到这种情况吗?急
4楼2010-06-25 19:45:17
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xkp123

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
是不是样品不干净?估计是这个原因
5楼2010-06-25 19:56:53
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wangyali1314

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
pplover(金币+1):感谢参与! 2010-06-27 17:07:20
一般情况下,换新柱子要平衡很长一段时间,半小时是肯定不够用的,你可以试试再平衡一段时间,可能会是柱子的问题
再者,磷酸氢二钠可能会对柱子有一定的影响啊
6楼2010-06-25 20:13:41
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wangyali1314

新虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
pplover(金币+1):感谢参与! 2010-06-27 17:24:44
你还可以试一下梯度洗脱,但一定不要用纯水啊·····
柱子一定要平衡好,有条件的话你平衡一晚上是最好的,把流速调小一下
7楼2010-06-25 20:23:57
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guoyang

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by lanlan1119 at 2010-06-25 16:57:38:
昨天刚拆开了一根新柱子,用纯甲醇1ml/min的流速冲洗了半小时。今天做样的时候发现了一个很奇怪的问题,最开始早上的出峰时间是35min,到下午5点的时候已经是25min了而且每一针的时间还在往前提。这期间室温和柱温 ...

你用的缓冲盐的pH较高, 不知道你的柱子的pH使用范围? 是否合适?
8楼2010-06-25 20:38:56
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yjj1314

金虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可能是样品不干净吧,你的样品是什么?
9楼2010-06-25 21:03:45
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lanlan1119

金虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by guoyang at 2010-06-25 20:38:56:


你用的缓冲盐的pH较高, 不知道你的柱子的pH使用范围? 是否合适?

agilent  的柱子耐2-9,我的流动相混合后PH为6.5左右,应该不会有问题
10楼2010-06-25 21:13:00
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