24小时热门版块排行榜    

查看: 2587  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题 已有7人参与

目前正在做通过重组大肠杆菌发酵产酶,该酶为胞内酶,主要的发酵过程分为两个阶段,第一阶段,37℃培养产生菌体,培养一定时间后开始进入第二阶段,降温诱导,需要加入诱导剂乳糖。现在有个疑问的就是,我在加入诱导剂的同时在发酵液中补入一定量的一种糖(这种糖为该酶转化时的底物),待诱导结束后测定酶活发现(将诱导阶段加入该酶的底物与不加该酶的底物进行比较):①.在诱导阶段加入该酶底物该酶酶活增加。②.在两种情况下的蛋白质含量差别不大。③.比酶活增加。
    以上现象是否可以认定是蛋白的表达量增加,同时想咨询一下有没有哪位朋友涉及到该方面内容的,或是有看到过有类似现象的文献报道的,希望大家能够给点建议这方面接下来应该怎么去分析。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-06-25 22:18:10:
我觉得不一定是显著增加 酶在有底物时表现出较强的催化活力 没底物时相对来讲就较低 可能是细胞基于经济性的一个调控特性  不知道楼主测酶活的具体手段是什么 应该不会是直接拿发酵液测定吧

由于是胞内酶,我测酶活的方法就是,发酵结束收集菌体,加缓冲洗涤一次,在菌体中加入底物进行酶转化,最后通过测定产物的量去计算酶活。
而我在发酵的诱导阶段加入底物后,酶的比活增加,想请教一下大家有没有看过类似方面的文献报道,可以给我参考一下。同时如果去研究这里面的机理应该从哪个方面去做,谢谢。
7楼2010-06-26 10:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

liouwzh

木虫 (正式写手)


看天(金币+1): 2010-06-25 22:13:28
Dream_鬼鬼(金币+1): 2010-06-26 09:50:45
我觉得可以通过PAGE电泳来分析目的蛋白的量是否增加。
2楼2010-06-25 15:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by liouwzh at 2010-06-25 15:31:07:
我觉得可以通过PAGE电泳来分析目的蛋白的量是否增加。

蛋白质含量我通过考马斯亮蓝法测过了,我疑惑的是我在诱导阶段加入底物(一种糖可以作为碳源)是否会对诱导酶活产生促进作用。
3楼2010-06-25 15:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

有人能回答一下吗?
4楼2010-06-25 19:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 293求调剂 +7 zjl的号 2026-03-16 12/600 2026-03-17 18:22 by 重科小霸王
[考研] 考研化学学硕调剂,一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-13 5/250 2026-03-17 10:15 by Sammy2
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +7 邱gl 2026-03-11 8/400 2026-03-17 09:36 by 努力学习赚彩礼
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 一志愿211 0703方向310分求调剂 +3 努力奋斗112 2026-03-15 3/150 2026-03-16 16:44 by houyaoxu
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 中科大材料与化工319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:10 by ms629
[考研] 297一志愿上交085600求调剂 +5 指尖八千里 2026-03-14 5/250 2026-03-14 17:26 by a不易
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] 315求调剂 +9 小羊小羊_ 2026-03-11 10/500 2026-03-13 21:13 by SXNU李老师
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 270求调剂 085600材料与化工专硕 +3 YXCT 2026-03-11 3/150 2026-03-13 10:13 by houyaoxu
[考研] 283求调剂,材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
请填处理意见