24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 2679  |  回复: 14
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】基因工程菌诱导蛋白表达的问题 已有7人参与

目前正在做通过重组大肠杆菌发酵产酶,该酶为胞内酶,主要的发酵过程分为两个阶段,第一阶段,37℃培养产生菌体,培养一定时间后开始进入第二阶段,降温诱导,需要加入诱导剂乳糖。现在有个疑问的就是,我在加入诱导剂的同时在发酵液中补入一定量的一种糖(这种糖为该酶转化时的底物),待诱导结束后测定酶活发现(将诱导阶段加入该酶的底物与不加该酶的底物进行比较):①.在诱导阶段加入该酶底物该酶酶活增加。②.在两种情况下的蛋白质含量差别不大。③.比酶活增加。
    以上现象是否可以认定是蛋白的表达量增加,同时想咨询一下有没有哪位朋友涉及到该方面内容的,或是有看到过有类似现象的文献报道的,希望大家能够给点建议这方面接下来应该怎么去分析。
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by 看天 at 2010-06-25 22:18:10:
我觉得不一定是显著增加 酶在有底物时表现出较强的催化活力 没底物时相对来讲就较低 可能是细胞基于经济性的一个调控特性  不知道楼主测酶活的具体手段是什么 应该不会是直接拿发酵液测定吧

由于是胞内酶,我测酶活的方法就是,发酵结束收集菌体,加缓冲洗涤一次,在菌体中加入底物进行酶转化,最后通过测定产物的量去计算酶活。
而我在发酵的诱导阶段加入底物后,酶的比活增加,想请教一下大家有没有看过类似方面的文献报道,可以给我参考一下。同时如果去研究这里面的机理应该从哪个方面去做,谢谢。
7楼2010-06-26 10:00:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 15 个回答

liouwzh

木虫 (正式写手)


看天(金币+1): 2010-06-25 22:13:28
Dream_鬼鬼(金币+1): 2010-06-26 09:50:45
我觉得可以通过PAGE电泳来分析目的蛋白的量是否增加。
2楼2010-06-25 15:31:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by liouwzh at 2010-06-25 15:31:07:
我觉得可以通过PAGE电泳来分析目的蛋白的量是否增加。

蛋白质含量我通过考马斯亮蓝法测过了,我疑惑的是我在诱导阶段加入底物(一种糖可以作为碳源)是否会对诱导酶活产生促进作用。
3楼2010-06-25 15:40:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Dream_鬼鬼

新虫 (小有名气)

有人能回答一下吗?
4楼2010-06-25 19:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 347材料专硕求调剂 +15 zj8215216 2026-04-06 15/750 2026-04-08 00:22 by JourneyLucky
[考研] 277、学硕,求调剂 数一104, +11 瓶子PZ 2026-04-07 12/600 2026-04-07 23:30 by 一只好果子?
[考研] 070300化学学硕311分求调剂 +16 梁富贵险中求 2026-04-04 17/850 2026-04-07 22:11 by lijunpoly
[考研] 0703总分331求调剂 +16 ZY-05 2026-04-04 20/1000 2026-04-07 18:00 by 蓝云思雨
[考研] 生物调剂 +5 橙子橙子橙子啊 2026-04-05 9/450 2026-04-07 15:31 by 上岸快快
[考研] 302分求调剂 一志愿安徽大学085601 +12 zyx上岸! 2026-04-04 12/600 2026-04-07 02:09 by BruceLiu320
[考研] 生物与医药求调剂 +7 heguanhua 2026-04-05 8/400 2026-04-06 18:41 by macy2011
[考研] (调剂)一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 272分求调剂 +4 wangyile2233 2026-04-02 4/200 2026-04-05 22:21 by 286640313
[考研] 329求调剂 +17 miaodesi 2026-04-02 20/1000 2026-04-05 18:33 by 蓝云思雨
[考研] 考研生物学考A区211,初试322,科目生化和生物综合,求调剂 +6 。。。54 2026-04-03 6/300 2026-04-05 14:54 by JOKER0401
[考研] 341求调剂 +3 学无止境,冲 2026-04-05 3/150 2026-04-05 09:40 by lbsjt
[考研] 085602调剂 初试总分335 +12 19123253302 2026-04-04 12/600 2026-04-05 08:08 by 544594351
[考研] 材料与化工306分找调剂 +23 沧海轻舟e 2026-04-02 27/1350 2026-04-04 21:52 by laoshidan
[考研] 305求调剂 +3 77Qi 2026-04-03 3/150 2026-04-03 23:01 by qzxyhcsy
[考研] 335求调剂 +7 沈清璃 2026-04-03 7/350 2026-04-03 18:55 by lijunpoly
[考研] 求材料调剂 一志愿南昌大学 328分 +5 yyy..... 2026-04-03 5/250 2026-04-03 13:46 by 百灵童888
[考研] 一志愿北京科技大学085601材料工程英一数二初试总分335求调剂 +9 双马尾痞老板2 2026-04-01 9/450 2026-04-02 12:14 by oooqiao
[考研] 261求B区调剂 +5 明仔· 2026-04-01 7/350 2026-04-02 11:17 by 邹尉尉
[考研] 292求调剂 +17 木虫er12138 2026-04-01 17/850 2026-04-01 21:37 by 七度不信任
信息提示
请填处理意见