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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR重复不出来，怎么回事？
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aofeng860308

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR重复不出来，怎么回事？ 已有14人参与

以前做过的PCR，结果很明显，可是最近接连做了好几遍，都没有出结果，得到的是一条很亮的非特异性条带！PCR体系完全一样，这是怎么回事，请高手指点！
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1楼 2010-06-23 12:41:29
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
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Originally posted by zemin_fang at 2010-06-23 17:09:33:
PCR几种试剂，一个一个换，进行验证。

水没有问题，每次都拿新的！
酶和buffer应该也没有问题，能扩增出来杂带！
引物换过了，重新稀释的！
模板也换过，新的旧的一个样！
但是还是出不来结果，郁闷……
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6楼2010-06-24 13:30:49
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
lmzxcom1:你引物怎么保存的，会不会污染后降解了 2010-06-24 19:38:37
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Originally posted by peilaming at 2010-06-23 17:18:54:
PCR就这样，实际上看起来很简单，P出来了什么都简单，一旦出不来原因就很多，不知道从哪里找。最可能还是引物吧

就是，影响因素太多了！引物重新稀释过的，也是一样！
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7楼2010-06-24 13:32:31
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by wjune1127 at 2010-06-23 18:07:34:
我的也是 。。。超级郁闷中

8楼2010-06-24 13:33:05
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 虫子火箭兵 at 2010-06-23 19:42:16:
PCR这个东西影响因素太多，一不小心就有可能P不出来，做实验前应冷静心态，状态不好就不要做了。

就是，但是实验总得做，没办法啊……
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9楼2010-06-24 13:34:01
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
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Originally posted by haoqian6135 at 2010-06-24 16:36:39:
PCR仪没有问题吧  换一个别的实验室的仪器试试   别人p的正常吗

我也这样想，不过有一个人的PCR能做!
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17楼2010-06-25 09:44:20
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
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Originally posted by 琴瑟不鸣 at 2010-06-24 17:24:03:
你确定之前P的不是非特异性条带啊

肯定不是，经测序鉴定！
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18楼2010-06-26 10:28:06
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
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Originally posted by 飘在海上的雪 at 2010-06-24 17:59:34:
我每次都有不 一样的结果

比我更悲惨……
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19楼2010-06-26 10:28:31
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
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Originally posted by skyqiuqiu119 at 2010-06-24 18:25:14:
这很正常啊，很多实验都是重复也不会产生相同的结果，你在变换一下温度和剂量试试，程序设计的也都正确吗？看来你又要重新找到合适的PCR条件了，祝你好运哈~~

估计只能这样子了，谢谢，希望快点找到！
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20楼2010-06-26 10:29:39
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aofeng860308

木虫 (正式写手)
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Originally posted by zemin_fang at 2010-06-24 21:28:45:
不要忽视dNTP，出问题的可能性也很大。

dNTP我也是重新稀释的！
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21楼2010-06-26 10:30:52
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