应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
52/1返回列表
查看: 2796  |  回复: 18
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊 已有10人参与

这是我设计的引物，前引物：5-GGG AAA TCT AGA CTC GTA GTA TCG GTT G-3其中TCT AGA是酶切位点，后引物：5-GG GTT GAT  CAG GAT CCC GTG -3，其中GGATCC是酶切位点，我的序列中包括酶切位点，PCR之后，琼脂糖凝胶电泳的条带很弱，再做酶切之后，就没有条带了，我是做PCR之后，酶切，连接，做感受态细胞的转化，请教各位高手是不是我引物设计的有问题，谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-06-22 10:08:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huan-liu

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
处于学习阶段，觉得3L解答的很好。
赞一下 回复此楼
18楼2013-03-25 18:42:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

lly198784

木虫 (正式写手)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
应该不是引物的问题，因为你PCR出来了，看看是不是PCR体系的问题！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-06-22 11:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buster

新虫 (初入文坛)
★
hutingting(金币+3):谢谢参与
会不会是酶切的问题呢。pcr之后条带很弱，酶切体系控制不好的话，没有条带很正常呢。为什么不多P几管合一起纯化后再酶切呢
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-06-22 11:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)
★ ★
hutingting(金币+3):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):很热心~~ 2010-06-22 13:57:43
你需要解决如下几个问题：1、带是否确信是你需要的条带？巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增；调整扩增温度；调整PCR体系；（不推荐二次PCR）。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够，或者是否合适?查一下PCR实验指南上面好像有一个大表，对每一个酶都有说明。4、感受态是否质量足够好？做一下检测，参照坛子里面相关内容。

[ Last edited by ququr008 on 2010-6-22 at 12:43 ]
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2010-06-22 12:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 289求调剂 +13 新时代材料 2026-03-27 13/650 2026-03-29 01:16 by 544594351
[考研] 332求调剂 +6 蕉蕉123 2026-03-28 6/300 2026-03-29 00:37 by 544594351
[考研] 材料学硕333求调剂 +10 北道巷 2026-03-24 10/500 2026-03-28 23:06 by 无际的草原
[考研] 328求调剂 +7 嗯滴的基本都 2026-03-27 7/350 2026-03-28 04:19 by fmesaito
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 一志愿211，335分，0856，求调剂院校和导师 +4 倾____萧 2026-03-27 5/250 2026-03-27 11:52 by zhshch
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 调剂 +4 柚柚yoyo 2026-03-26 4/200 2026-03-26 20:43 by fmesaito
[考研] 352求调剂 +4 大米饭！ 2026-03-22 4/200 2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 材料科学与工程 317求调剂 +4 JKSOIID 2026-03-26 4/200 2026-03-26 15:58 by 不吃魚的貓
[考研] 303求调剂 +6 蓝山月 2026-03-25 6/300 2026-03-25 22:47 by 418490947
[考研] 07化学303求调剂 +5 睿08 2026-03-25 5/250 2026-03-25 22:46 by 418490947
[考研] 机械学硕总分317求调剂！！！！ +4 Acaciad 2026-03-25 4/200 2026-03-25 19:59 by hanserlol
[考研] 一志愿武理085500机械专业总分300求调剂 +3 an10101 2026-03-24 7/350 2026-03-25 00:00 by 山鬼0-
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
[考研] 一志愿国科过程所081700，274求调剂 +3 三水研0水立方 2026-03-23 3/150 2026-03-23 23:11 by MajorWen
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭