24小时热门版块排行榜    

查看: 3245  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】PCR引物设计出来了,但酶切之后电泳没条带啊 已有10人参与

这是我设计的引物,前引物:5-GGG AAA TCT AGA CTC GTA GTA TCG GTT G-3其中TCT AGA是酶切位点,后引物:5-GG GTT GAT  CAG GAT CCC GTG -3,其中GGATCC是酶切位点,我的序列中包括酶切位点,PCR之后,琼脂糖凝胶电泳的条带很弱,再做酶切之后,就没有条带了,我是做PCR之后,酶切,连接,做感受态细胞的转化,请教各位高手是不是我引物设计的有问题,谢谢啦
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hutingting

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by hutingting at 2010-06-22 14:10:16:

谢谢啦

模板:CTC GTA GTA TCG GTT GTA GCA GTT CTG GTC TAT AAG TTC TAT TTT CAC GGG ATC CTG ATC AAC CCA
14楼2010-06-23 16:20:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

lly198784

木虫 (正式写手)


hutingting(金币+3):谢谢参与
应该不是引物的问题,因为你PCR出来了,看看是不是PCR体系的问题!
2楼2010-06-22 11:22:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

buster

新虫 (初入文坛)


hutingting(金币+3):谢谢参与
会不会是酶切的问题呢。pcr之后条带很弱,酶切体系控制不好的话,没有条带很正常呢。为什么不多P几管合一起纯化后再酶切呢
3楼2010-06-22 11:56:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)

★ ★
hutingting(金币+3):谢谢参与
lstt09nk(金币+1):很热心~~ 2010-06-22 13:57:43
你需要解决如下几个问题:1、带是否确信是你需要的条带?巢式PCR可以确认。2、带比较弱的问题。放大量扩增;调整扩增温度;调整PCR体系;(不推荐二次PCR)。3、检查酶切位点后面的保护碱基是否数量足够,或者是否合适?查一下PCR实验指南上面好像有一个大表,对每一个酶都有说明。4、感受态是否质量足够好?做一下检测,参照坛子里面相关内容。

[ Last edited by ququr008 on 2010-6-22 at 12:43 ]
4楼2010-06-22 12:41:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 面上函评意见出来了,像什么等级? 20+3 Tsingking1 2026-08-27 14/700 2026-09-01 08:29 by 尼古拉斯小虫
[基金申请] 基金未中,这种答复是模板吗? +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[基金申请] 能否申诉? +7 echo8914667 2026-08-30 8/400 2026-08-31 17:00 by yihongxu
[基金申请] 基金不中,共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知? +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 我不理解! +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件,有关系吗? +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 牛来!米来!面来! +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
信息提示
请填处理意见