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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】PCR扩增核心片段,再也扩不出来了,怎么办已有11人参与

自己设计引物做PCR扩增一核心片段,以前扩出来过,并且很特异,带很亮,回收了,转化没成功,重新扩,再也扩不出来了,怎么办?现在所有的试剂、反应条件都跟以前一摸一样,PCR后跑电泳却只有很长的拖带,请问是怎么回事?如何才能重新把那条带扩出来?
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不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
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hospitals

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到同样的问题,8月份扩增很是顺利,结果中间出了一趟差,再扩增就总是扩增不出来了,各种方法都试过了,模板重提,引物重新合成,PCR试剂也换过,重复啊重复,现在还在重复,都有点怀疑自己了~~~~~~
16楼2013-11-29 09:42:00
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xpb2005

银虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
模板是以前的还是重提的?
2楼2010-06-12 20:39:59
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lixg

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
估计是模板降解了,重新制备下模板试试。另外,PCR的时候作平行的两管。
3楼2010-06-13 08:21:08
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阳光金鱼唐

金虫 (著名写手)

引用回帖:
Originally posted by xpb2005 at 2010-06-12 20:39:59:
模板是以前的还是重提的?

模板没问题,扩b-actin扩的很好
不知道什么是生活了,也不知道生活是什么了
4楼2010-06-13 11:26:48
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