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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】寻找合适的载体-问题补充已有6人参与

有谁知道宝生物的pRI 101载体咋样吗?我的目的基因不适合pBI121,也不适合pCAMBIA系列的载体,还有没有其他植物高效表达载体可用呢?我对这方面不了解,请朋友们指点啊!

请把问题说清楚,才好帮忙解答,谢谢。 [/quote]
主要是酶切位点不合适,要切掉pBI121上的GUS,下游只能有SacⅠ,而我的基因有这个酶切位点,其他酶切都会将NOS终止子切掉。pCAMBIA系列载体是不是都大同小异,若从MCS处加入目的基因,那么还需要启动子和终止子,也没有合适的中间载体,若将GUS取代,其两侧的酶切位点不是在我的基因里有,就是载体本身含有两个同样的酶切位点。

说得比较啰嗦,不知说清楚没有

[ Last edited by zwx26_2006 on 2010-6-9 at 23:35 ]
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ben1147

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+2):谢谢交流~ 2010-06-09 23:22:08
为什么不适合这些载体?是酶切位点不合适还是筛选标记不合适?说说清楚才好分析
pBI121不能用的话还有pBI101
pCAMBIA系列那么多载体,都不能用?
2楼2010-06-09 22:01:59
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yinbo2002

银虫 (小有名气)


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请把问题说清楚,才好帮忙解答,谢谢。
3楼2010-06-09 22:41:33
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-09 22:01:59:
为什么不适合这些载体?是酶切位点不合适还是筛选标记不合适?说说清楚才好分析
pBI121不能用的话还有pBI101
pCAMBIA系列那么多载体,都不能用?

多研究研究质粒,以后向你请教呢还得
小木虫之有关部门负责人
4楼2010-06-09 23:22:34
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)


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可考虑PCR目的基因,subcloing!
5楼2010-06-10 05:06:54
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wangxueqin

金虫 (小有名气)


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貌似很复杂,来学习的。
6楼2010-06-10 07:53:16
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gaowei706

铁杆木虫 (职业作家)

资深潜水者


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
可以用重组载体
逐渐失去棱角
7楼2010-06-10 09:04:57
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ben1147

木虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by zwx26_2006 at 2010-06-09 21:11:31:
有谁知道宝生物的pRI 101载体咋样吗?我的目的基因不适合pBI121,也不适合pCAMBIA系列的载体,还有没有其他植物高效表达载体可用呢?我对这方面不了解,请朋友们指点啊!

请把问题说清楚,才好帮忙解答,谢谢。 ...

基因里面有切点不是大问题

我曾经用pBI121构过一个载体,也是切掉GUS,Bam HI和Sac I切,插入片段也有Sac I切点,控制一下酶切时间,部分酶切,回收长度正确的片段就行了

换载体可能会引入其他位置的因素。如果转基因体系什么都是成熟的话,尽量避免换载体
8楼2010-06-10 14:16:43
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