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zwx26_2006

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】寻找合适的载体-问题补充 已有6人参与

有谁知道宝生物的pRI 101载体咋样吗？我的目的基因不适合pBI121，也不适合pCAMBIA系列的载体，还有没有其他植物高效表达载体可用呢？我对这方面不了解，请朋友们指点啊！

请把问题说清楚，才好帮忙解答，谢谢。 [/quote]
主要是酶切位点不合适，要切掉pBI121上的GUS，下游只能有SacⅠ，而我的基因有这个酶切位点，其他酶切都会将NOS终止子切掉。pCAMBIA系列载体是不是都大同小异，若从MCS处加入目的基因，那么还需要启动子和终止子，也没有合适的中间载体，若将GUS取代，其两侧的酶切位点不是在我的基因里有，就是载体本身含有两个同样的酶切位点。

说得比较啰嗦，不知说清楚没有

[ Last edited by zwx26_2006 on 2010-6-9 at 23:35 ]
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1楼 2010-06-09 21:11:31
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ben1147

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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scelab(金币+2):谢谢交流~ 2010-06-09 23:22:08
为什么不适合这些载体？是酶切位点不合适还是筛选标记不合适？说说清楚才好分析
pBI121不能用的话还有pBI101
pCAMBIA系列那么多载体，都不能用？
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2楼2010-06-09 22:01:59
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yinbo2002

银虫 (小有名气)
★
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请把问题说清楚，才好帮忙解答，谢谢。
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3楼2010-06-09 22:41:33
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scelab

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫之有关部门负责人
★
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引用回帖:
Originally posted by ben1147 at 2010-06-09 22:01:59:
为什么不适合这些载体？是酶切位点不合适还是筛选标记不合适？说说清楚才好分析
pBI121不能用的话还有pBI101
pCAMBIA系列那么多载体，都不能用？

多研究研究质粒，以后向你请教呢还得
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小木虫之有关部门负责人
4楼2010-06-09 23:22:34
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ljsh

铁杆木虫 (著名写手)
★
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可考虑PCR目的基因，subcloing！
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5楼2010-06-10 05:06:54
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wangxueqin

金虫 (小有名气)
★
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貌似很复杂，来学习的。
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6楼2010-06-10 07:53:16
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gaowei706

铁杆木虫 (职业作家)

资深潜水者
★
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可以用重组载体
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逐渐失去棱角
7楼2010-06-10 09:04:57
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ben1147

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by zwx26_2006 at 2010-06-09 21:11:31:
有谁知道宝生物的pRI 101载体咋样吗？我的目的基因不适合pBI121，也不适合pCAMBIA系列的载体，还有没有其他植物高效表达载体可用呢？我对这方面不了解，请朋友们指点啊！

请把问题说清楚，才好帮忙解答，谢谢。 ...

基因里面有切点不是大问题

我曾经用pBI121构过一个载体，也是切掉GUS，Bam HI和Sac I切，插入片段也有Sac I切点，控制一下酶切时间，部分酶切，回收长度正确的片段就行了

换载体可能会引入其他位置的因素。如果转基因体系什么都是成熟的话，尽量避免换载体
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8楼2010-06-10 14:16:43
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