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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】基因组中克隆启动子
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nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】基因组中克隆启动子 已有7人参与

我要从番茄基因组中克隆一启动子大概2200bp，怎么也P不出来，好不容易偶尔P出来条带还很弱，承蒙各位大侠赐教啊怎么回事呢～～
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努力做就有结果～
1楼 2010-06-07 21:50:52
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yuqianswim

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也在扩启动子，3400bp，一个月了也没有什么进展，主要是杂带太多，而且和目的条带距离很近，连切胶都不好切，移植郁闷中，下面附上一张图，本人认为“1”对应的泳道，从上数，第3条为我的目的条带大小。我试过提高温度，减少模板用量，都不行，我设计的引物是20bp左右。pcr体系20微升：buffer：2微升，dNTP:2.4，引物各1微升，模板：基因组DNA：0.4微升，LA酶：0.2。请各位大侠指教

图片1.jpg
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7楼2013-02-27 17:06:55
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-08 06:14:24
启动子GC含量比较低，设计引物的时候设计长一点看看，我一般24-26 bp左右比较容易就P出来了。
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Thank-you，so-blue.
2楼2010-06-07 23:10:17
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我用35bp以上的引物，扩增没问题。
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3楼2010-06-08 06:51:10
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surferl

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
但因要扩增全长,设计引物时收到序列的限制,扩增时可以用温度梯度,或者二次扩证
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4楼2010-06-08 08:44:05
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