24小时热门版块排行榜    

查看: 2653  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

nnsulei

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】基因组中克隆启动子 已有7人参与

我要从番茄基因组中克隆一启动子大概2200bp,怎么也P不出来,好不容易偶尔P出来条带还很弱,承蒙各位大侠赐教啊怎么回事呢~~
回复此楼
努力做就有结果~
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ququr008

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-08 22:33:39
从复杂基因组环境扩增一段启动子常常会遇到扩不出来,是很正常的。以上所说的各种方法都可以用来一试,你自己还可以想出很多的办法,没有绝对有效的办法,如果有钱,你甚至可以用合成的办法,也有人用分段扩增再连接的办法。只要扩出来有目的片段大小的带,并且条带清晰就好办。至于信号弱一点,可以加大扩增量(管数)或者调整扩增条件,来解决。只要扩出了目的片段,就可以采用T载体等办法构入载体。
6楼2010-06-08 10:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
reasonspare(金币+2):谢谢分享。 2010-06-08 06:14:24
启动子GC含量比较低,设计引物的时候设计长一点看看,我一般24-26 bp左右比较容易就P出来了。
Thank-you,so-blue.
2楼2010-06-07 23:10:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我用35bp以上的引物,扩增没问题。
3楼2010-06-08 06:51:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

surferl

铜虫 (正式写手)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
但因要扩增全长,设计引物时收到序列的限制,扩增时可以用温度梯度,或者二次扩证
4楼2010-06-08 08:44:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见