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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
spiderboy(金币+3):thanks,,clear 2010-06-04 11:22:46
抗体对抗原的识别无论是空间还是线性表位都是基于氨基酸序列的。一个蛋白在具有三级结构后有连续的表位也会有不连续的表位，而连续的表位也可能和线性的时候一样，所以即使变性了，认识这个部分的抗体还是能过检测到抗原。但是如果某一表位呈空间结构，那么变性后成线性的了，选择一抗就需要选择认识线性位点的。所以一抗的选择很重要。
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52187644
11楼2010-06-02 20:59:00
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奋斗的猪猪

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by dianaofyezi at 2010-06-02 20:59:00:
抗体对抗原的识别无论是空间还是线性表位都是基于氨基酸序列的。一个蛋白在具有三级结构后有连续的表位也会有不连续的表位，而连续的表位也可能和线性的时候一样，所以即使变性了，认识这个部分的抗体还是能过检测 ...

那自己纯化的蛋白制作出来的抗体呢？也有无法识别的可能，该怎么办呢？
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12楼2010-06-04 20:32:24
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
至于是否能够识别不能用嘴巴说的，而是实验才知道的。如果是用蛋白制备的多抗，用于WB检测，还是可以认识的，毕竟多抗是针对多个表位的。但是如果是类似IHC或者IF这样的实验是否一定识别，那就要看运气了，但是从目前来说还是很多这样的抗体是用多抗制备的。所以你可以好好的分析下序列，或者查找相关的文献看看。
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52187644
13楼2010-06-11 13:38:15
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wangdunzju

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼上几位说的很对，线性表位决定的抗体不受蛋白变性的影响，而空间表位的抗体因为蛋白变性后失去了识别所需的空间结构，从而丧失免疫活性。如果是多抗，它属于混合抗体，一般都能识别变性蛋白；如果是非常特异的单抗，如果它恰好属于空间表位抗体，那么就没法识别变性蛋白，只能识别具有天然构象的蛋白。这样说不知楼主是否可以理解。仅供参考。
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14楼2014-02-10 10:25:41
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