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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？
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spiderboy

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？ 已有12人参与

western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗？
天然构想被破坏了，特异性识别位点也被破坏了，怎么还能和一抗结合？
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1楼 2010-06-01 20:24:44
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dianaofyezi

金虫 (正式写手)
spiderboy(金币+3):thanks,,clear 2010-06-04 11:22:46
抗体对抗原的识别无论是空间还是线性表位都是基于氨基酸序列的。一个蛋白在具有三级结构后有连续的表位也会有不连续的表位，而连续的表位也可能和线性的时候一样，所以即使变性了，认识这个部分的抗体还是能过检测到抗原。但是如果某一表位呈空间结构，那么变性后成线性的了，选择一抗就需要选择认识线性位点的。所以一抗的选择很重要。
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52187644
11楼2010-06-02 20:59:00
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
前几天听了个讲座，说WB用的抗体在制备过程中就是以变性蛋白为靶标的。

。。。

不知道对不对，仅供参考！
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3楼2010-06-01 21:32:43
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郑B.CoA

金虫 (正式写手)
有一些一抗是抗特异氨基酸序列的。。好像叫线性表位。。。变性蛋白会失去三维构象，一抗是可以结合的

[ Last edited by 郑B.CoA on 2010-6-1 at 22:43 ]
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4楼2010-06-01 22:41:39
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piupme

铜虫 (小有名气)
抗体与抗原结合的力有好几种，你这时只加一种抗体进入就不会要求特异性了吧，自己感觉。。。
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5楼2010-06-01 23:15:41
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