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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 【求助】关于HPLC
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binbin27_lee

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助】关于HPLC 已有7人参与

该物质极易溶于甲醇，不溶于水，样品溶于甲醇，我用甲醇：水做流动相，用的是安捷伦1100   C18反相柱，我用了甲醇：水=8：2和5:5，结果都是用100%甲醇进样和溶于甲醇的样品进样，几乎在相同时间出峰，但是溶于甲醇的样品出的峰明显高于纯甲醇出的峰，请问高手，我该如何让这2个物质分离开来呢？不甚感激！
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我离开却始终等待！
1楼 2010-05-28 09:36:12
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zhongweixu

铁杆木虫 (著名写手)
binbin27_lee(金币+1):改了，还是分不开 2010-05-30 23:57:13
先把流动相改成甲醇：水=10:90看看
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2楼2010-05-28 10:22:55
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yangxinlei

binbin27_lee(金币+1):不太懂 2010-05-30 23:57:39
几分钟出峰的啊，纯甲醇怎么会有峰呢？是不是梯度峰，或者是你的样品在死时间就出峰啦。
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3楼2010-05-28 10:23:36
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hellohygo

★
pplover(金币+1):感谢参与！有道理哦！ 2010-05-28 21:41:42
引用回帖:
Originally posted by binbin27_lee at 2010-05-28 09:36:12:
该物质极易溶于甲醇，不溶于水，样品溶于甲醇，我用甲醇：水做流动相，用的是安捷伦1100   C18反相柱，我用了甲醇：水=8：2和5:5，结果都是用100%甲醇进样和溶于甲醇的样品进样，几乎在相同时间出峰，但是溶于甲醇 ...

有机相比例太高，导致甲醇峰和药物峰重合
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4楼2010-05-28 10:32:42
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sunjiawen

木虫 (正式写手)
你应该先用薄板跑一下试试条件吧！
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5楼2010-05-28 10:56:19
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binbin27_lee

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhongweixu at 2010-05-28 10:22:55:
先把流动相改成甲醇：水=10:90看看

我做了20:80的，100%甲醇出了4个峰，样品也是，比前面2个流动相的多了2个峰
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我离开却始终等待！
6楼2010-05-28 17:03:40
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binbin27_lee

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by sunjiawen at 2010-05-28 10:56:19:
你应该先用薄板跑一下试试条件吧！

这个做了，可是由于那个物质是未知的，显色方法很难选，我就用了碘蒸气，出了一个黄色斑点
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我离开却始终等待！
7楼2010-05-28 17:06:04
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xkp123

木虫 (著名写手)
是的，有机相比例太高了，降低吧
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8楼2010-05-28 21:39:30
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sunjiawen

木虫 (正式写手)
展开剂可以试试硫酸，起码是有机物就基本就能看到。
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9楼2010-05-30 09:35:38
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西湖醉鱼

版主 (知名作家)

皇家神龙教-鱼族族长
binbin27_lee(金币+2):谢谢，他们都说我的有机相浓度过高了，你还让我从100%开始？ 2010-05-31 18:53:21
由强到弱：一般先用100%的乙腈(或甲醇)/0%的水(或缓冲溶液)进行试验， 这样可以很快地得到分离结果，然后根据出峰情况调整有机溶剂(乙腈或甲醇)的比例。
三倍规则 ：每减少10%的有机溶剂(甲醇或乙腈)的量，保留因子约增加3倍，此为三倍规则。在此过程中，注意观察各个峰的分离情况。
精细调整：当分离达到一定程度，应将有机溶剂10%的改变量调整为5%，并据此规则逐渐降低调整率，直至各组分的分离情况不再改变。
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相互交流求进步
10楼2010-05-31 16:47:54
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