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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】生物样品的前处理-沉淀蛋白质
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小珍珍

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】生物样品的前处理-沉淀蛋白质 已有12人参与

书上讲的和一篇文献里讲的有些矛盾，但是我又是初学者不敢确定自己理解得对不对，想和虫友们讨论一下。
       生物样品进高效前都要经过前处理，在沉淀蛋白质时有一种方法是加入能与水混溶的有机溶剂。
      一、书上讲到
      “加入甲醇或乙腈后对血浆样品有一定的稀释作用，上清液中药物浓度会比原来低，且由于甲醇或乙腈的存在无法再用三氯甲烷、乙酸乙酯等有机溶剂萃取和浓集，甲醇-水（或乙腈-水）的混合液也很难挥干浓集，因此用甲醇或乙腈沉淀蛋白质直接进行测定的方法有时达不到反相HPLC测定灵敏度要求"。
       二、但是我在一篇文献上又看到
      '血浆样品为0.5 mL,加于聚丙烯离心管中;加入0·7 mL甲醇,手动振摇1 min; 3 500 r/min离心10 min;取上清液于另一离心管中,以0.5 mol/LNaOH调节pH至9;加入0.5 mL三氯甲烷,手动震摇10 min;然后以3 500 r/min离心10 min;取上清液,用0.5 mL三氯甲烷再提取一次后,小心弃去上清与氯仿层中间的变性蛋白层,合并二次的氯仿层, 40~50℃水浴挥干氯仿;在剩余残渣中加入500μL流动相,震荡使其溶解,过滤后上样。'
       文献里用甲醇做变性剂后继续用三氯甲烷来提取  是不是有问题啊

[ Last edited by 小珍珍 on 2010-5-8 at 14:08 ]
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1楼 2010-05-08 14:03:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

billy96406

铁杆木虫 (小有名气)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:50
文献中的方法的样品最终是存在于氯仿层中，加甲醇是使蛋白变性，沉淀，加碱碱化游离，进入氯仿层，并不是和书中所说的加甲醇或乙腈沉淀蛋白直接进样。两者是有区别的。
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4楼2010-05-08 21:30:27
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xuwen78

禁虫 (小有名气)
★
小珍珍(金币+1): 2010-05-10 10:56:19
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:31
本帖内容被屏蔽
5楼2010-05-09 10:44:17
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
★
小珍珍(金币+2): 2010-05-10 10:53:39
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:39
小珍珍(金币+1): 2010-05-19 00:41:18
为什么液液萃取前还要进行蛋白沉淀呢
推荐一个液液萃取的萃取液
正己烷-二氯甲烷-异丙醇（2:1:0.1），可在血浆中适当地加入1mol/L的碳酸钠，然后加入萃取液，涡旋，取上清吹干，流动相复溶，再高速离心一下；
根据药物的回收率 调整萃取液的三者比例
一般能达到要求
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6楼2010-05-10 10:43:55
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普通回帖

hongqianqian

银虫 (小有名气)
哪本书上这么说过呢？
文献里德做法没错~
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快乐多多，好运多多~
2楼2010-05-08 16:16:13
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小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by hongqianqian at 2010-05-08 16:16:13:
哪本书上这么说过呢？
文献里德做法没错~

傅强主编的药物分析实验方法学，人民卫生出版社的
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3楼2010-05-08 20:01:34
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小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2010-05-10 10:43:55:
为什么液液萃取前还要进行蛋白沉淀呢
推荐一个液液萃取的萃取液
正己烷-二氯甲烷-异丙醇（2:1:0.1），可在血浆中适当地加入1mol/L的碳酸钠，然后加入萃取液，涡旋，取上清吹干，流动相复溶，再高速离心一下；
...

谢谢  我去尝试一下
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7楼2010-05-10 10:53:21
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小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by xuwen78 at 2010-05-09 10:44:17:
书上讲的是对的，也是普遍适用的，但有时血浆中的杂质对测定有干扰采用一种方法预处理不能完全去除时会考虑采用多种预处理方法联用，这篇文献就是如此，即蛋白沉淀+液液萃取，通常情况下液液萃取很少加与水混溶的 ...

液液萃取的目的是不是为了更多地除去杂志保护柱子，还有就是提高提取回收率？有说是液液萃取反而会降低回收率，是这样吗？
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8楼2010-05-10 10:56:00
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xuwen78

禁虫 (小有名气)
★
xiaodu2007693(金币+1):谢谢参与交流~ 2010-05-10 14:39:18
小珍珍(金币+1): 2010-05-11 12:23:30
本帖内容被屏蔽
9楼2010-05-10 14:29:14
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小珍珍

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2010-05-10 10:43:55:
为什么液液萃取前还要进行蛋白沉淀呢
推荐一个液液萃取的萃取液
正己烷-二氯甲烷-异丙醇（2:1:0.1），可在血浆中适当地加入1mol/L的碳酸钠，然后加入萃取液，涡旋，取上清吹干，流动相复溶，再高速离心一下；
...

加入1mol/L的碳酸钠的作用是什么呀？
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10楼2010-05-19 00:41:00
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