| 查看: 2036 | 回复: 14 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
[交流]
【求助/交流】大量金币感谢，基因克隆表达。 已有12人参与
|
|||
|
我想在E.coli中表达一个外源基因，并且要这个基因表达出来具有酶活性，能够转化底物，合成新的产物。但是有一点不明白的就是：在克隆外源基因的时候，从ATG开始，到TAA结束？还是从更上游的位置开始到更下游的位置结束？这两者之间有什么区别呢？ 第二个问题：如果在同一载体上克隆表达两个基因，这两个基因如何连接呢？是第一个基因的TAA直接续接第二个基因的ATG？还是中间需要添加一些片段？ 各位大侠啊：我是在读的硕士研究生，要开展分子生物学的课题。由于导师在这方面不太精通，因此求助一个问题。 [ Last edited by zhmy26 on 2010-5-12 at 08:28 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有67人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
pidou213
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2446.1
- 散金: 400
- 红花: 5
- 帖子: 913
- 在线: 45.9小时
- 虫号: 448545
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
15楼2010-05-12 23:17:39
2楼2010-05-05 08:44:45
snoopyzxx
木虫 (著名写手)
- MolEPI: 4
- 应助: 49 (小学生)
- 金币: 2891.1
- 散金: 1276
- 红花: 43
- 帖子: 2259
- 在线: 277.9小时
- 虫号: 548497
- 注册: 2008-04-19
- 性别: MM
- 专业: 全球变化生态学
★ ★ ★ ★
zhmy26(金币+2): 2010-05-05 13:54:51
scelab(金币+4):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-05 15:33:31
zhmy26(金币+2): 2010-05-05 13:54:51
scelab(金币+4):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-05-05 15:33:31
|
有很多载体可以选择，比如pet系列的。看你的要求，你可以使用非融合表达，即表达时不带标签，可以表达出天然的目的蛋白。一般表达载体都是载体具有启动子的，不需要自行添加，你只需将目的基因插入相应的酶切位点就可以了，至于终止，你可以使用载体上的终止子，你也可以在设计引物时自己加上双终止子TGATAA，我们一般都是自己加双终止子。表达的时候，载体是从启动子之后的第一个ATG开始表达，直到终止密码子。 第二个问题，现在有很多双表达系统可以选择，这种系统具有多个启动子，可以插入多个目的基因，这种系统表达出来的每个蛋白是独立分开的。而楼上介绍的SOE拼接表达出来的两个蛋白一般是连在一起的。 |
3楼2010-05-05 09:34:30
fungixx
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 37 (小学生)
- 贵宾: 3.458
- 金币: 19627.6
- 散金: 18645
- 红花: 118
- 沙发: 273
- 帖子: 13324
- 在线: 2030.8小时
- 虫号: 860534
- 注册: 2009-09-30
- 专业: 抗肿瘤药物药理
4楼2010-05-05 09:40:27
