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[交流] 【求助】水解氨基酸 检测不出来

反相色谱检测水解氨基酸的时候不能出峰
想请教各位高手:
1氨基酸标准品的出峰完全正常,没有一点问题;
2标准品和样品进样都是5ul、 虽有我将样品进样量提高到20ul,仍然一点也不能出峰;
我实用的酸水解方法是:
准确称取一定量样品,使样品氨基酸总量在50~75mg范围内, 置于20-30mL安瓿瓶中,加入10mL含0.1%苯酚的6mol/L盐酸, 振摇使样品溶解或使样品均匀分散于溶液中,将安瓿瓶置-20℃冰箱中冷冻3~5min,充氮后用喷灯熔封,然后置110±1℃烘箱中水解24小时, 取出冷却,打开安瓿瓶,将水解液全部转移到50mL容量瓶内,用超纯水或去离子水定容至刻度,混匀, 供衍生使用。

想不明白为什么会一点也不能出峰。
水解的时候充氮和密封都是没有问题的。
如果密封不好是不是会出现这种情况?
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