| 查看: 1007 | 回复: 4 | |||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | |||
pidou213木虫 (正式写手)
|
[交流]
【求助/交流】RACE 引物 已有4人参与
|
||
|
请问做RACE的引物用什么纯化比较好？ HAP? PAGE?? 还是其他？？ 突然想到的，不知道怎么选择 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有150人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 通过RT-PCR 获得了一段保守序列 接着如何设计RACE引物
已经有21人回复
- 关于takata公司的5‘RACE试剂盒中的引物设计
已经有13人回复
- 已经得到cDNA部分碱基序列，怎么样用RACE技术扩增基因的3‘和5’末端
已经有11人回复
- 【求助/交流】RACE特异引物不够特异
已经有7人回复
- 【求助/交流】5'-RACE求助
已经有8人回复
- 3‘RACE---测序结果没有polyA尾巴，怎么回事？
已经有6人回复
pidou213
木虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 2446.1
- 散金: 400
- 红花: 5
- 帖子: 913
- 在线: 45.9小时
- 虫号: 448545
- 注册: 2007-11-01
- 性别: GG
- 专业: 农业昆虫学
|
为什么引物在某些时候需要纯化 DNA合成结束后，完整的DNA链在碱性溶液（如氢氧化铵）的作用下从固相支持物中解理下来。解离下来的溶液中既包含了完整的所需寡核苷酸，同时也包含了在合成过程中失败的DNA链（错误序列）。比如合成一个20个碱基寡核苷酸，其洗脱溶液中也包含了19，18，17个碱基等合成时错误的序列。错误序列的数量取决于合成效率。在许多实验如PCR中，这些错误的序列会与正确的全长产物竞争，因此在使用之前需要将其去除以提高下游应用的成功率。 不同应用对纯化方式的选择 应用领域 建议的纯化方式 AFLPTM 分析 脱盐引物在限制性片段扩增多态性研究（ARFP）中可被成功应用 反义研究 HPLC纯化的引物在相关文献中引用最多 循环测序 脱盐纯化的引物已经足够 文库构建中的第一链cDNA合成 用于文库构建中第一链合成的cDNA通常在其5’端有限制性内切酶克隆位点，因此最好用全长的，通过Cartridge、HPLC或PAGE纯化的引物 荧光测序 四种纯化级别的引物都可成功应用 凝胶迁移实验 建议使用Cartridge、HPLC和PAGE纯化的引物进行凝胶迁移率实验 GeneTrapper筛选 建议使用PAGE纯化引物。如果购买了脱盐引物，可以使用PAGE纯化说明书对其进行进一步纯化。在GeneTrapper系统中的加尾反应时，引物需要事先经过酚抽提和乙醇沉淀。 恒温测序 脱盐引物已经足够，Cartridge、HPLC和PAGE纯化引物也可以。 微阵列 标准脱盐引物已经足够 PCR 对于标准PCR，脱盐引物即可正常使用，其它三种纯度更高的方式也可以 5’端序列较为重要的PCR（例如限制性酶切位点，RNA聚合酶启动子） 为达到最高效率，Cartridge、，HPLC和PAGE纯化的引物是最好的选择。因为引物合成是从3’端到5’端，不完整的寡核苷酸的会从5’端缺失。在这些应用中使用5’端序列完整的全长序列是很重要的，否则缺失5’端部分序列的一组PCR产物将被合成 克隆接头产物 全长引物最适合有效的克隆，利用Cartridge、HPLC或PAGE纯化方式可得到合适的引物。对大于60个碱基的引物，PAGE纯化方式是最好的 位点特异性突变 一定要使用通过Cartridge、HPLC和PAGE纯化得到的全长引物，才可能得到最高比例的突变体克隆（尤其是预突变位点在5’端附近时）。采用脱盐引物也可以得到想要的突变。然而，一些野生型亲本载体有可能会覆盖掉这些突变。 |
3楼2010-04-29 18:49:25
695
木虫 (职业作家)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 4528.5
- 散金: 126
- 红花: 5
- 帖子: 3149
- 在线: 394.1小时
- 虫号: 347369
- 注册: 2007-04-16
- 专业: 植物生理与生化
2楼2010-04-29 18:38:40
cato8163
银虫 (正式写手)
- 应助: 5 (幼儿园)
- 金币: 83.8
- 散金: 20
- 帖子: 384
- 在线: 74.4小时
- 虫号: 569576
- 注册: 2008-06-05
- 性别: GG
- 专业: 草地科学
4楼2010-04-29 21:42:15
5楼2010-04-30 09:15:35
