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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请教原核表达菌株Rosetta gami(DE3)的生长时间 已有4人参与

各位好,昨天刚刚转了几个质粒到Rosett agami(DE3)菌株中,加上其本身的三种抗性,连同质粒的抗性一共是加了四种抗生素。到现在已经有快18个小时还没有单克隆出现。
请问用过这个菌株的虫友们要多长时间才能长出来?

谢谢!
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hxwhu

木虫 (小有名气)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
我曾经做过这个RgD,生长要慢一点,但似乎没有你说的那么慢。你要逐一在使用前活化一两次,记得常用抗生素也只剩下amp可以使用了,merck的这个东西我感觉用处不大。当时我的蛋白,包涵体还是包涵体,没有改观
4楼2010-09-13 12:35:49
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-04-27 12:23
引用回帖:
Originally posted by dfl204 at 2010-04-27 10:35:51:
各位好,昨天刚刚转了几个质粒到Rosett agami(DE3)菌株中,加上其本身的三种抗性,连同质粒的抗性一共是加了四种抗生素。到现在已经有快18个小时还没有单克隆出现。
请问用过这个菌株的虫友们要多长时间才能长 ...

需要大约24hr,而且也就是大约1mm直径。

大小就是 如以下的句号一样

。  。。   。。   。。。
。   。。 。  。  。              。。。      。

。。   。。     。。  。。。

。。。  。 。 。  。。 。 。

比BL21DE3长的缓慢多了!这主要是Tet 抗性的原因,而不是其他抗生素造成的。据我的经验,Tet对重组蛋白表达许多时候没有好处。
可以考虑不用加Tet 。只利用其密码子偏好的Cam 抗性和你质粒的抗性就行了。

[ Last edited by HarveyWang on 2010-4-27 at 10:42 ]
【我一直认为做土匪很性感很坏,很直接,可以大声喊:JCMM我爱你!所以,我自从博士毕业后,就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2010-04-27 10:40:09
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

非常感谢HarveyWang 的经验交流,学习了!
3楼2010-04-27 10:44:00
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450454588

铜虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流, 2010-11-23 09:32:14
我做了数个克隆子感觉虽然慢一点,但会生长起来的!而且效果还行,这个菌真的是要有耐心才能搞好,
学无止境
5楼2010-11-23 08:53:18
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