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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】请教原核表达菌株Rosetta gami（DE3）的生长时间
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】请教原核表达菌株Rosetta gami（DE3）的生长时间 已有4人参与

各位好，昨天刚刚转了几个质粒到Rosett agami（DE3）菌株中，加上其本身的三种抗性，连同质粒的抗性一共是加了四种抗生素。到现在已经有快18个小时还没有单克隆出现。
请问用过这个菌株的虫友们要多长时间才能长出来？

谢谢！
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1楼 2010-04-27 10:35:51
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HarveyWang

捐助贵宾 (知名作家)

海外行者
★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 2010-04-27 12:23
引用回帖:
Originally posted by dfl204 at 2010-04-27 10:35:51:
各位好，昨天刚刚转了几个质粒到Rosett agami（DE3）菌株中，加上其本身的三种抗性，连同质粒的抗性一共是加了四种抗生素。到现在已经有快18个小时还没有单克隆出现。
请问用过这个菌株的虫友们要多长时间才能长 ...

需要大约24hr，而且也就是大约1mm直径。

大小就是 如以下的句号一样

。  。。   。。   。。。
。   。。 。  。  。              。。。      。

。。   。。     。。  。。。

。。。  。 。 。  。。 。 。

比BL21DE3长的缓慢多了！这主要是Tet 抗性的原因，而不是其他抗生素造成的。据我的经验，Tet对重组蛋白表达许多时候没有好处。
可以考虑不用加Tet 。只利用其密码子偏好的Cam 抗性和你质粒的抗性就行了。

[ Last edited by HarveyWang on 2010-4-27 at 10:42 ]
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【我一直认为做土匪很性感很坏，很直接，可以大声喊：JCMM我爱你！所以，我自从博士毕业后，就一直在寻找黑道大哥一起去抢钱、抢粮、抢地盘】
2楼2010-04-27 10:40:09
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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)
非常感谢HarveyWang 的经验交流，学习了!
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3楼2010-04-27 10:44:00
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hxwhu

木虫 (小有名气)
★
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我曾经做过这个RgD，生长要慢一点，但似乎没有你说的那么慢。你要逐一在使用前活化一两次，记得常用抗生素也只剩下amp可以使用了，merck的这个东西我感觉用处不大。当时我的蛋白，包涵体还是包涵体，没有改观
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4楼2010-09-13 12:35:49
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450454588

铜虫 (初入文坛)
★ ★
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lstt09nk(金币+1):感谢交流， 2010-11-23 09:32:14
我做了数个克隆子感觉虽然慢一点，但会生长起来的！而且效果还行，这个菌真的是要有耐心才能搞好，
赞一下(2人) 回复此楼
学无止境
5楼2010-11-23 08:53:18
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