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dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

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[交流] 【求助/交流】请教原核表达菌株Rosetta gami（DE3）的生长时间已有4人参与

各位好，昨天刚刚转了几个质粒到Rosett agami（DE3）菌株中，加上其本身的三种抗性，连同质粒的抗性一共是加了四种抗生素。到现在已经有快18个小时还没有单克隆出现。
请问用过这个菌株的虫友们要多长时间才能长出来？

谢谢！

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1楼2010-04-27 10:35:51

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HarveyWang

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3): 2010-04-27 12:23

引用回帖:

Originally posted by dfl204 at 2010-04-27 10:35:51:
各位好，昨天刚刚转了几个质粒到Rosett agami（DE3）菌株中，加上其本身的三种抗性，连同质粒的抗性一共是加了四种抗生素。到现在已经有快18个小时还没有单克隆出现。
请问用过这个菌株的虫友们要多长时间才能长 ...

需要大约24hr，而且也就是大约1mm直径。

大小就是如以下的句号一样

。  。。。。。。。
。。。。  。  。             。。。    。

。。。。    。。  。。。

。。。  。。。  。。。。

比BL21DE3长的缓慢多了！这主要是Tet 抗性的原因，而不是其他抗生素造成的。据我的经验，Tet对重组蛋白表达许多时候没有好处。
可以考虑不用加Tet 。只利用其密码子偏好的Cam 抗性和你质粒的抗性就行了。

[ Last edited by HarveyWang on 2010-4-27 at 10:42 ]