应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用水PCR出1K条带
91/1返回列表
查看: 1352  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

elliott2591

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】用水PCR出1K条带 已有4人参与

最近按分子克隆做5‘RACE，结果以cDNA为模板，PCR没有出来条带，反而以水为对照的出来1K条带，求助是什么原因？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-04-24 11:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+2): 2010-04-24 13:09
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-04-24 13:22
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
原因一：对照和目的管弄反了
原因二：对照管污染了且目的管选择体系及程序不合理
原因三：目的管忘记加酶，对照管中出现引物自连。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-04-24 13:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)

回复

引用回帖:
Originally posted by shengwufenzi at 2010-04-24 13:05:35:
原因一：对照和目的管弄反了
原因二：对照管污染了且目的管选择体系及程序不合理
原因三：目的管忘记加酶，对照管中出现引物自连。

1、没有弄反，可以确定
2、污染问题：我换了新的primer，dNTP，Taq，水，还是有带，所以污染可能性不大
3、程序不合理：程序不合理？
4、引物自连：可以连出1k条带吗？且加模板的体系没有条带！
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-24 15:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
楼主做的是什么物种的5RACE？如果是菌的污染就常见了
换了新东西，药品应该没有问题了，水就不好说了，有可能是水污染
还有你说引物换了，5RACE，cDNA接头的引物也换了吗？很有可能是这个引物有问题
赞一下 回复此楼
4楼2010-04-24 17:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-24 17:08:42:
楼主做的是什么物种的5RACE？如果是菌的污染就常见了
换了新东西，药品应该没有问题了，水就不好说了，有可能是水污染
还有你说引物换了，5RACE，cDNA接头的引物也换了吗？很有可能是这个引物有问题

我做的是棉花的，水是高压灭菌的，cDNA接头我试了两种，结果都有问题，都有条带，但条带大小不一致。
另外，我设计了5个特异引物，结果，都有条带，只是有条带大小不一致，且非特异，无规律性
赞一下 回复此楼
5楼2010-04-24 18:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
听BioRad工程师说过 阴性对照出现扩增条带是很常见的
建议换一下水吧
赞一下 回复此楼
尔非我焉知我悲喜
6楼2010-04-24 19:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sdluqun at 2010-04-24 19:04:46:
听BioRad工程师说过 阴性对照出现扩增条带是很常见的
建议换一下水吧

谢谢
回复此楼
7楼2010-04-24 19:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
如果水有污染，高压灭菌是无法解决的，这是水质量的问题
做棉花基因组，按常理说不应该是水污染，应该是什么药品中混有棉花的cDNA或者基因组了
引物更换过，还是污染说明引物没有问题，其他的药品也都换过，这就比较奇怪，是不是之前将棉花的基因导入过质粒呢？
赞一下 回复此楼
8楼2010-04-24 19:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-24 19:19:24:
如果水有污染，高压灭菌是无法解决的，这是水质量的问题
做棉花基因组，按常理说不应该是水污染，应该是什么药品中混有棉花的cDNA或者基因组了
引物更换过，还是污染说明引物没有问题，其他的药品也都换过，这就 ...

如果是其他药品中有棉花cDNA污染的话，我是不是可以测序检测一下？
赞一下 回复此楼
9楼2010-04-24 20:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 elliott2591 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 085600 英一数二272求调剂 5+4 vida_a 2026-03-01 12/600 2026-03-02 16:19 by @飒飒飒飒
[考研] 材料284求调剂，一志愿郑州大学英一数二专硕 +12 想上岸的土拨鼠 2026-02-28 12/600 2026-03-02 16:18 by youmomaoyan
[考研] 化学，材料，环境类求调剂 +3 考研版棒棒 2026-03-02 3/150 2026-03-02 16:10 by @飒飒飒飒
[考研] 290分材料工程085601求调剂 数二英一 +3 llx0610 2026-03-02 3/150 2026-03-02 14:15 by yc258
[考博] 诚招农业博士 +3 心欣向荣 2026-02-28 3/150 2026-03-02 13:33 by 时间不狗
[考研] 材料学硕318求调剂 +9 February_Feb 2026-03-01 9/450 2026-03-02 13:31 by njzyff
[考研] 一志愿山东大学材料与化工325求调剂 +3 半截的诗0927 2026-03-02 3/150 2026-03-02 12:58 by houyaoxu
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +6 ieewxg 2026-02-25 7/350 2026-03-02 12:44 by stidwellNK
[考研] 292求调剂 +7 yhk_819 2026-02-28 7/350 2026-03-02 12:43 by 无际的草原
[考研] 考研复试调剂，过国家线的同学都可报名 +3 黑！在干嘛 2026-02-28 4/200 2026-03-02 12:20 by 花鱼不是鱼
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 9/450 2026-03-02 12:04 by 52hz~~
[考研] 268求调剂 +4 简单点0 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:54 by ms629
[基金申请] 此成果不能导入原因：元数据必填信息不完整，可 进行补充。 +4 Kittylucky 2026-03-02 5/250 2026-03-02 11:07 by jurkat.1640
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +5 pin8023 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:33 by ZY，先生
[考研] 275求调剂 +3 L-xin? 2026-03-01 6/300 2026-03-02 10:22 by 热情沙漠
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +5 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:47 by 无际的草原
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +6 Soliloquy_Q 2026-02-28 11/550 2026-03-01 11:14 by 歌liekkas
[硕博家园] 2025届双非化工硕士毕业，申博 +3 更多的是 2026-02-27 4/200 2026-03-01 10:04 by ztg729
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭