应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】用水PCR出1K条带
91/1返回列表
查看: 1400  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

elliott2591

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】用水PCR出1K条带 已有4人参与

最近按分子克隆做5‘RACE，结果以cDNA为模板，PCR没有出来条带，反而以水为对照的出来1K条带，求助是什么原因？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2010-04-24 11:59:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengwufenzi

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+2): 2010-04-24 13:09
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-04-24 13:22
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
原因一：对照和目的管弄反了
原因二：对照管污染了且目的管选择体系及程序不合理
原因三：目的管忘记加酶，对照管中出现引物自连。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-04-24 13:05:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)

回复

引用回帖:
Originally posted by shengwufenzi at 2010-04-24 13:05:35:
原因一：对照和目的管弄反了
原因二：对照管污染了且目的管选择体系及程序不合理
原因三：目的管忘记加酶，对照管中出现引物自连。

1、没有弄反，可以确定
2、污染问题：我换了新的primer，dNTP，Taq，水，还是有带，所以污染可能性不大
3、程序不合理：程序不合理？
4、引物自连：可以连出1k条带吗？且加模板的体系没有条带！
赞一下 回复此楼
3楼2010-04-24 15:47:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
楼主做的是什么物种的5RACE？如果是菌的污染就常见了
换了新东西，药品应该没有问题了，水就不好说了，有可能是水污染
还有你说引物换了，5RACE，cDNA接头的引物也换了吗？很有可能是这个引物有问题
赞一下 回复此楼
4楼2010-04-24 17:08:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-24 17:08:42:
楼主做的是什么物种的5RACE？如果是菌的污染就常见了
换了新东西，药品应该没有问题了，水就不好说了，有可能是水污染
还有你说引物换了，5RACE，cDNA接头的引物也换了吗？很有可能是这个引物有问题

我做的是棉花的，水是高压灭菌的，cDNA接头我试了两种，结果都有问题，都有条带，但条带大小不一致。
另外，我设计了5个特异引物，结果，都有条带，只是有条带大小不一致，且非特异，无规律性
赞一下 回复此楼
5楼2010-04-24 18:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
听BioRad工程师说过 阴性对照出现扩增条带是很常见的
建议换一下水吧
赞一下 回复此楼
尔非我焉知我悲喜
6楼2010-04-24 19:04:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by sdluqun at 2010-04-24 19:04:46:
听BioRad工程师说过 阴性对照出现扩增条带是很常见的
建议换一下水吧

谢谢
回复此楼
7楼2010-04-24 19:18:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yujiaping1

木虫 (著名写手)
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
如果水有污染，高压灭菌是无法解决的，这是水质量的问题
做棉花基因组，按常理说不应该是水污染，应该是什么药品中混有棉花的cDNA或者基因组了
引物更换过，还是污染说明引物没有问题，其他的药品也都换过，这就比较奇怪，是不是之前将棉花的基因导入过质粒呢？
赞一下 回复此楼
8楼2010-04-24 19:19:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

elliott2591

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yujiaping1 at 2010-04-24 19:19:24:
如果水有污染，高压灭菌是无法解决的，这是水质量的问题
做棉花基因组，按常理说不应该是水污染，应该是什么药品中混有棉花的cDNA或者基因组了
引物更换过，还是污染说明引物没有问题，其他的药品也都换过，这就 ...

如果是其他药品中有棉花cDNA污染的话，我是不是可以测序检测一下？
赞一下 回复此楼
9楼2010-04-24 20:40:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 elliott2591 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 303求调剂 +10 SereinQ 2026-04-10 11/550 2026-04-11 11:35 by AA小小木虫
[考研] 电气工程专硕320求调剂 +4 小麻子111 2026-04-10 4/200 2026-04-11 10:19 by Delta2012
[考研] 346，工科求调剂 +3 moser233 2026-04-09 3/150 2026-04-11 10:04 by zhq0425
[考研] 301求调剂 +5 XYPLR 2026-04-05 7/350 2026-04-11 10:03 by zhq0425
[考研] 311求调剂 +13 xyp想读书 2026-04-10 14/700 2026-04-11 09:41 by 猪会飞
[考研] 材料专业344求调剂 +16 hualkop 2026-04-10 21/1050 2026-04-10 17:28 by laoshidan
[考研] 一志愿华东师范生物学326分，求调剂 +8 刘墨墨 2026-04-09 8/400 2026-04-10 12:00 by pengliang8036
[考研] 生物学求调剂 一志愿沪9，326分 +7 刘墨墨 2026-04-06 7/350 2026-04-10 08:11 by kangsm
[考研] 288求调剂，一志愿华南理工大学071005 +16 ioodiiij 2026-04-08 16/800 2026-04-09 23:08 by wolf97
[考研] 337求调剂 +4 Gky09300550， 2026-04-09 4/200 2026-04-09 17:18 by 帕尔马拉特
[考研] 招收有机化学、化工，药学，食品灯专业学生 +3 yrfhjgdj 2026-04-08 3/150 2026-04-09 10:15 by QYQX_123
[考研] 353求调剂 +8 晴空万里air 2026-04-07 8/400 2026-04-09 00:18 by GouQ
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 化工学硕 285求调剂 +26 Wisjxn 2026-04-07 26/1300 2026-04-08 14:42 by screening
[考研] 22408 266求调剂 +11 masss11222 2026-04-07 14/700 2026-04-08 11:06 by yulian1987
[考研] 323求调剂 +3 林zlu 2026-04-07 4/200 2026-04-07 23:21 by lbsjt
[考研] 生物学学硕求调剂：351分一志愿南京师范大学生物学专业 +6 …～、王…～ 2026-04-06 7/350 2026-04-06 18:54 by macy2011
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 一志愿北京交通大学材料工程总分358求调剂 +4 cs0106 2026-04-04 4/200 2026-04-05 18:46 by imissbao
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭