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elliott2591

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】用水PCR出1K条带已有4人参与

最近按分子克隆做5‘RACE,结果以cDNA为模板,PCR没有出来条带,反而以水为对照的出来1K条带,求助是什么原因?
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sdluqun

铁杆木虫 (著名写手)

板砖队长

elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
听BioRad工程师说过 阴性对照出现扩增条带是很常见的
建议换一下水吧
尔非我焉知我悲喜
6楼2010-04-24 19:04:46
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shengwufenzi

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
lstt09nk(金币+2): 2010-04-24 13:09
1949stone(金币+2):谢谢交流 2010-04-24 13:22
elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
原因一:对照和目的管弄反了
原因二:对照管污染了且目的管选择体系及程序不合理
原因三:目的管忘记加酶,对照管中出现引物自连。
2楼2010-04-24 13:05:35
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elliott2591

金虫 (小有名气)

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引用回帖:
Originally posted by shengwufenzi at 2010-04-24 13:05:35:
原因一:对照和目的管弄反了
原因二:对照管污染了且目的管选择体系及程序不合理
原因三:目的管忘记加酶,对照管中出现引物自连。

1、没有弄反,可以确定
2、污染问题:我换了新的primer,dNTP,Taq,水,还是有带,所以污染可能性不大
3、程序不合理:程序不合理?
4、引物自连:可以连出1k条带吗?且加模板的体系没有条带!
3楼2010-04-24 15:47:26
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yujiaping1

木虫 (著名写手)

elliott2591(金币+1): 2010-04-25 20:21
楼主做的是什么物种的5RACE?如果是菌的污染就常见了
换了新东西,药品应该没有问题了,水就不好说了,有可能是水污染
还有你说引物换了,5RACE,cDNA接头的引物也换了吗?很有可能是这个引物有问题
4楼2010-04-24 17:08:42
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