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ashelychan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】发酵液复筛实验中发酵液总是没有活性怎么办 已有3人参与

我从土壤里筛选到了一株芽孢杆菌,平板对峙实验结果显示具有较好的拮抗活性。但是,当我把它拿去发酵培养,取其发酵液上清(上清液经过微膜过滤除菌)进行复筛实验时,发现没有显示出任何拮抗活性,这是怎么回事?该怎么解决?
附:平板对峙实验采用周对峙,对峙温度是25度。发酵液复筛实验采用打孔法或者牛津杯法,复筛温度也是25度。发酵条件为30度、220rpm,培养48h,种龄为12-24小时,发酵液配方为LB液体培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基或者马铃薯葡萄糖培养基。文献上这些方法都能有活性。为什么我的总是没有活性,该如何解决?另外,拮抗菌转接多代会不会也导致没有拮抗活性啊?我的发酵用的菌种好像转接了很多代了。
    请各位大侠指点迷津。谢谢。
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bamyl

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
发酵液离心后,先确定是上清液还是菌体有抑菌性,如果是上清液可以离心后加个样看有没有抑菌圈,或者80℃水浴除菌,过膜有可能会把抑菌物质除去。好的菌种先保存好。
7楼2014-04-09 15:08:15
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85715623

木虫 (正式写手)

ashelychan(金币+1): 2010-04-27 21:31
ashelychan(金币+1):谢谢您的建议,让我茅塞顿开。不过我想知道具体的浓缩方法,请指点一二。 2010-05-05 08:57:08
传代多次的话会导致退化。还要考虑产物浓度问题,你接种菌体的话会持续产生产物,而用牛津杯则含量较低,应考虑浓缩。
2楼2010-04-27 08:16:04
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ashelychan

木虫 (小有名气)

可是,现在我不知道我的培养基能不能让它产生活性物质,这时候我应该是先做发酵液拮抗实验而不是先浓缩吧?采用什么方法进行发酵液拮抗实验才能有活性显示?怎样进行浓缩啊?呵呵,刚入行,不懂的地方较多,请多多指点,谢谢。
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3楼2010-04-27 21:31:03
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qiuzhenlu

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
plantaqp(金币+3): 2010-05-01 01:41
楼主您好,对于微生物固体培养和液体培养很可能产生不同的物质,所以你说平板培养有活性液体培养无活性是正常的现象。建议你将固体培养的成分与液体培养的成分分别做个tlc之类的物质鉴定,看看物质是不是一样。
4楼2010-04-30 23:42:20
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