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ashelychan

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】发酵液复筛实验中发酵液总是没有活性怎么办 已有3人参与

我从土壤里筛选到了一株芽孢杆菌,平板对峙实验结果显示具有较好的拮抗活性。但是,当我把它拿去发酵培养,取其发酵液上清(上清液经过微膜过滤除菌)进行复筛实验时,发现没有显示出任何拮抗活性,这是怎么回事?该怎么解决?
附:平板对峙实验采用周对峙,对峙温度是25度。发酵液复筛实验采用打孔法或者牛津杯法,复筛温度也是25度。发酵条件为30度、220rpm,培养48h,种龄为12-24小时,发酵液配方为LB液体培养基、牛肉膏蛋白胨液体培养基或者马铃薯葡萄糖培养基。文献上这些方法都能有活性。为什么我的总是没有活性,该如何解决?另外,拮抗菌转接多代会不会也导致没有拮抗活性啊?我的发酵用的菌种好像转接了很多代了。
    请各位大侠指点迷津。谢谢。
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85715623

木虫 (正式写手)

ashelychan(金币+1): 2010-04-27 21:31
ashelychan(金币+1):谢谢您的建议,让我茅塞顿开。不过我想知道具体的浓缩方法,请指点一二。 2010-05-05 08:57:08
传代多次的话会导致退化。还要考虑产物浓度问题,你接种菌体的话会持续产生产物,而用牛津杯则含量较低,应考虑浓缩。
2楼2010-04-27 08:16:04
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ashelychan

木虫 (小有名气)

可是,现在我不知道我的培养基能不能让它产生活性物质,这时候我应该是先做发酵液拮抗实验而不是先浓缩吧?采用什么方法进行发酵液拮抗实验才能有活性显示?怎样进行浓缩啊?呵呵,刚入行,不懂的地方较多,请多多指点,谢谢。
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3楼2010-04-27 21:31:03
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qiuzhenlu

铜虫 (初入文坛)

★ ★ ★
plantaqp(金币+3): 2010-05-01 01:41
楼主您好,对于微生物固体培养和液体培养很可能产生不同的物质,所以你说平板培养有活性液体培养无活性是正常的现象。建议你将固体培养的成分与液体培养的成分分别做个tlc之类的物质鉴定,看看物质是不是一样。
4楼2010-04-30 23:42:20
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ashelychan

木虫 (小有名气)

不好意思,请问什么是tlc?呵呵呵,请别见笑,本人不懂之处颇多。还有,你所说的固体培养的成分与液体培养的成分是指拮抗菌在这两种情况下所产生的活性物质吗?是将这两种活性物质拿去做tlc吗?
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5楼2010-05-05 08:58:31
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gswyhq

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
567220楼: Originally posted by ashelychan at 2010-05-05 08:58:31
不好意思,请问什么是tlc?呵呵呵,请别见笑,本人不懂之处颇多。还有,你所说的固体培养的成分与液体培养的成分是指拮抗菌在这两种情况下所产生的活性物质吗?是将这两种活性物质拿去做tlc吗?

现在回答你,估计你早已毕业了,有点迟了。但为了后来人的交流学习,还是说两句。
tlc:薄层色谱法(Thin-Layer Chromatography);个人认为:“qiuzhenlu ”大侠的意思是通过tlc比较固体发酵和液体发酵成分差异,说的“成分”是指所有发酵完后所有的物质,而不仅仅是指活性抑菌物质。
6楼2012-07-02 10:33:34
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bamyl

银虫 (小有名气)

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
发酵液离心后,先确定是上清液还是菌体有抑菌性,如果是上清液可以离心后加个样看有没有抑菌圈,或者80℃水浴除菌,过膜有可能会把抑菌物质除去。好的菌种先保存好。
7楼2014-04-09 15:08:15
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