版块导航: 正在加载中...

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

返回列表

当前主题已经存档。

【有奖交流】积极回复本帖子，参与交流，就有机会分得作者 yinsongna 的 4 个金币

yinsongna

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 693.5
散金: 646
帖子: 487
在线: 51.4小时
虫号: 817196
注册: 2009-07-28

[交流] 【求助/交流】转化失败已有10人参与

最近半个多月做的转化，板子都是干干净净，具体情况是：往载体上加基因，基因和载体都是进行双酶切，酶切位点是EcorI和SalI，用的fermentas的酶，原先是双酶切再连接，一直转化不成功，后来改为两次单酶切再连接，还是转化不成功。
原以为是没切开，但是进行但酶切的时候可以确定都切开了，连接用的solutionI 连接7h，转化之后还是不长，同时我用相同的感受态转其他质粒做对照，都能长出来，这也可以确定感受态没有问题，操作也没有问题。
转化十多遍了，现在想不出问题到底出在什么地方，跪请高手指点啊

回复此楼

» 猜你喜欢

解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景已经有0人回复
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有240人回复
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析已经有1人回复
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展已经有0人回复
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍已经有0人回复
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner 已经有0人回复
GSPT1口服分子胶降解剂MRT-2359 | Biochempartner 已经有0人回复
碳青霉烯类抗生素为何需联用西司他丁钠？ | Biochempartner 已经有0人回复
源自蕨类植物的抗炎美白活性分子去甲氧基荚果蕨素 | Biochempartner 已经有0人回复
肠道里的"代谢开关"：Fexaramine用肠道限制性重新定义 FXR 激动剂已经有0人回复

1楼 2010-04-13 20:01:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3624.4
帖子: 703
在线: 337.8小时
虫号: 568607
注册: 2008-06-03
性别: MM
专业: 微生物生理与生物化学

★
scelab(金币+1):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-14 00:20
yinsongna(金币+1): 2010-04-14 12:45

是不是抗生素的问题？种类和剂量都对么？

赞一下(1人)

回复此楼

2楼2010-04-13 22:19:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2446.1
散金: 400
红花: 5
帖子: 913
在线: 45.9小时
虫号: 448545
注册: 2007-11-01
性别: GG
专业: 农业昆虫学

★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-14 00:20
yinsongna(金币+1): 2010-04-14 12:47

1、我觉得你酶切以后应该跑电泳看看切的如何？
2、涂板的技术也是一个问题，我有的时候就是把菌落全都涂在平板的边上了
3、转化的时间和温度，因该控制好
4、如楼上所说，筛选药剂的量和质量要控制好

赞一下(1人)

回复此楼

见得多爱的多

3楼2010-04-13 23:47:56

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 5 (幼儿园)
金币: 1534.5
红花: 1
帖子: 601
在线: 284.4小时
虫号: 527924
注册: 2008-03-18
性别: GG
专业: 生物化学

yinsongna(金币+1): 2010-04-14 12:48

不是酶切回收的大片段和目的基因吗，我也是用这两个酶切的，很成功，做了两板，每板上都是长了很多，祝好运

赞一下

回复此楼

4楼2010-04-14 12:43:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 693.5
散金: 646
帖子: 487
在线: 51.4小时
虫号: 817196
注册: 2009-07-28

引用回帖:

Originally posted by wordsworth3180 at 2010-04-13 22:19:41:
是不是抗生素的问题？种类和剂量都对么？

抗生素是倒板子的时候直接加的，直接就是有抗生素的板子，做前面几个的时候都很正常

赞一下

回复此楼

5楼2010-04-14 12:45:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 693.5
散金: 646
帖子: 487
在线: 51.4小时
虫号: 817196
注册: 2009-07-28

引用回帖:

Originally posted by pidou213 at 2010-04-13 23:47:56:
1、我觉得你酶切以后应该跑电泳看看切的如何？
2、涂板的技术也是一个问题，我有的时候就是把菌落全都涂在平板的边上了
3、转化的时间和温度，因该控制好
4、如楼上所说，筛选药剂的量和质量要控制好

单酶切电泳看是切的很完全的，涂板问题的话，我同时还涂了2个质粒作对照，但是我涂的对照板子都长的好好的啊，应该不是涂板的问题吧

赞一下

回复此楼

6楼2010-04-14 12:47:03

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 693.5
散金: 646
帖子: 487
在线: 51.4小时
虫号: 817196
注册: 2009-07-28

引用回帖:

Originally posted by w.king124 at 2010-04-14 12:43:32:
不是酶切回收的大片段和目的基因吗，我也是用这两个酶切的，很成功，做了两板，每板上都是长了很多，祝好运

你用的哪家的酶啊我后来做两次单酶切的时候都要切10h以上。。。。

赞一下

回复此楼

7楼2010-04-14 12:48:12

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

gandalf886

银虫 (小有名气)

应助: 6 (幼儿园)
金币: 463.9
帖子: 131
在线: 22.9小时
虫号: 257022
注册: 2006-06-03
性别: GG
专业: 分子生物学

引用回帖:

Originally posted by yinsongna at 2010-04-13 20:01:03:
最近半个多月做的转化，板子都是干干净净，具体情况是：往载体上加基因，基因和载体都是进行双酶切，酶切位点是EcorI和SalI，用的fermentas的酶，原先是双酶切再连接，一直转化不成功，后来改为两次单酶切再连接， ...

你这个两个酶切位点是不是挨着

赞一下

回复此楼

8楼2010-04-14 12:58:16

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖