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yinsongna

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[交流] 【求助/交流】转化失败已有10人参与

最近半个多月做的转化，板子都是干干净净，具体情况是：往载体上加基因，基因和载体都是进行双酶切，酶切位点是EcorI和SalI，用的fermentas的酶，原先是双酶切再连接，一直转化不成功，后来改为两次单酶切再连接，还是转化不成功。
原以为是没切开，但是进行但酶切的时候可以确定都切开了，连接用的solutionI 连接7h，转化之后还是不长，同时我用相同的感受态转其他质粒做对照，都能长出来，这也可以确定感受态没有问题，操作也没有问题。
转化十多遍了，现在想不出问题到底出在什么地方，跪请高手指点啊

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1楼 2010-04-13 20:01:03

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gandalf886

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引用回帖:

Originally posted by yinsongna at 2010-04-13 20:01:03:
最近半个多月做的转化，板子都是干干净净，具体情况是：往载体上加基因，基因和载体都是进行双酶切，酶切位点是EcorI和SalI，用的fermentas的酶，原先是双酶切再连接，一直转化不成功，后来改为两次单酶切再连接， ...

你这个两个酶切位点是不是挨着