24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 957  |  回复: 17
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 yinsongna 的 4 个金币
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

yinsongna

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】转化失败 已有10人参与

最近半个多月做的转化,板子都是干干净净,具体情况是:往载体上加基因,基因和载体都是进行双酶切,酶切位点是EcorI和SalI,用的fermentas的酶,原先是双酶切再连接,一直转化不成功,后来改为两次单酶切再连接,还是转化不成功。
原以为是没切开,但是进行但酶切的时候可以确定都切开了,连接用的solutionI 连接7h,转化之后还是不长,同时我用相同的感受态转其他质粒做对照,都能长出来,这也可以确定感受态没有问题,操作也没有问题。
转化十多遍了,现在想不出问题到底出在什么地方,跪请高手指点啊
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lls850225

银虫 (小有名气)

加大片段的量试一试,我也据到过类似的~
10楼2010-04-14 16:02:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

wordsworth3180

木虫 (正式写手)


scelab(金币+1):欢迎多来交流!:tiger06: 2010-04-14 00:20
yinsongna(金币+1): 2010-04-14 12:45
是不是抗生素的问题?种类和剂量都对么?
2楼2010-04-13 22:19:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
scelab(金币+3):热心虫友,欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-14 00:20
yinsongna(金币+1): 2010-04-14 12:47
1、我觉得你酶切以后应该跑电泳看看切的如何?
2、涂板的技术也是一个问题,我有的时候就是把菌落全都涂在平板的边上了
3、转化的时间和温度,因该控制好
4、如楼上所说,筛选药剂的量和质量要控制好
见得多爱的多
3楼2010-04-13 23:47:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

w.king124

金虫 (正式写手)


yinsongna(金币+1): 2010-04-14 12:48
不是酶切回收的大片段和目的基因吗,我也是用这两个酶切的,很成功,做了两板,每板上都是长了很多,祝好运
4楼2010-04-14 12:43:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +6 77Qi 2026-04-07 6/300 2026-04-12 02:30 by 秋豆菜芽
[考研] 347求调剂 +4 mhyqyy 2026-04-06 4/200 2026-04-12 02:27 by 秋豆菜芽
[考研] 085410 273求调剂 +9 X1999 2026-04-09 9/450 2026-04-12 00:46 by 丛麟ll
[考研] 化工调剂求导师收留!一志愿失利,踏实肯干,有植物提取科研经历 +20 yzyzx 2026-04-09 21/1050 2026-04-12 00:12 by 小小小小啦啦啦
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 求调剂 +6 小聂爱学习 2026-04-11 9/450 2026-04-11 21:20 by 蓝云思雨
[教师之家] 请问地理、遥感方面,可以做哪些横向项目啊,纵向完不成考核啊 +3 锦衣卫寒战 2026-04-07 5/250 2026-04-11 20:51 by 豫椒
[考研] 087100初试311求调剂 +4 任雅琴 2026-04-09 4/200 2026-04-11 10:33 by zhq0425
[考研] 复试调剂 +9 积极向上; 2026-04-10 11/550 2026-04-11 09:25 by 猪会飞
[考研] 302分求调剂 +9 凡语祈愿 2026-04-08 10/500 2026-04-10 23:26 by 314126402
[考研] 282,电气工程专业,求调剂,不挑专业 +9 jggshjkkm 2026-04-10 9/450 2026-04-10 14:55 by 逆水乘风
[考研] 材料调剂 +5 hzhahg 2026-04-06 5/250 2026-04-10 10:10 by may_新宇
[考研] 求调剂希望还是希望在山河四省附近 +3 快乐的小白鸽 2026-04-05 3/150 2026-04-09 17:36 by wp06
[考研] 265求调剂 +4 风说她早忘了 2026-04-07 4/200 2026-04-09 13:59 by only周
[考研] 一志愿985初试354分生物调剂 +3 031001 2026-04-06 3/150 2026-04-09 00:30 by Evan_Liu
[考研] 071000生物学,一志愿深圳大学296分,求调剂 +12 TIckLw 2026-04-06 13/650 2026-04-07 20:34 by lijunpoly
[考研] 325 调剂 +6 QQ小虾 2026-04-07 6/300 2026-04-07 15:17 by Ccclqqq
[考研] 372分材料与化工(085600)英二数二求调剂 +4 蓝笺片 2026-04-06 4/200 2026-04-07 12:30 by dongzh2009
[考研] 求助 +3 卡卡东88 2026-04-06 4/200 2026-04-06 15:28 by going home
[考研] 277求调剂 +5 考研调剂lxh 2026-04-05 5/250 2026-04-05 19:03 by chy09050039
信息提示
请填处理意见