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w.king124

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】做过原核表达的高手请进！！！已有10人参与

轮状病毒VP7基因连到pET32a上，在BL21中诱导表达，没有出结果，怎么办呀，急死了

我该换载体还是菌株呢？大家有做过的推荐一下啊，谢谢了

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1楼2010-04-13 08:51:45

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月月大可

木虫 (著名写手)

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w.king124(金币+2):谢谢你的回答！ 2010-04-13 12:50
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-13 13:24

测序结果出来后一定要比对整个阅读框，从T7启动子区开始到终止密码子地方。
对该基因进行稀有密码子分析，看是否存在大量串联的稀有密码子出现，大量出现也会影响表达。如果是建议更换Rosetta系列菌株。
是否为膜蛋白，膜蛋白有些时候表达有一定难度。
如何鉴定不表达？取诱导前诱导后 SDS-PAGE鉴定？一些表达量低的这种方法确实看不到表达。
同时也可以做另一手准备，换载体试试看。
最后，不是所有的蛋白都可以在原核表达中表达出来的，少量蛋白不能表达，原因不详。