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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么算PCR的引物退火温度啊？
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】怎么算PCR的引物退火温度啊？ 已有17人参与

我现在在做毕业论文，第一次做PCR，老师把引物合成报告单给我，我不知道怎么算，大家帮帮忙：
      BAR       5’-GGCGTAACCCTCGTAGAT-3'
      length:18      GC:55%
      MW: 5,500.60          nmoles per OD : 5.14
      Tm:  50.92摄氏度  （0.05M Na+）;    59.28摄氏度（1M Na+）
      Package:1.00  OD  X  2   
      引物浓度老师说10um/L

[ Last edited by 邓娟 on 2010-4-12 at 13:28 ]
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就这么熬着，什么时候是个头……
1楼 2010-04-12 13:27:43
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

光算是不行的

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+2): 2010-04-12 20:42
要是算出来的都行，那就不是生物学了，还得实验，这个也是调出来的，要试很多次，把温度按区间调试。不信你等着瞧吧，至于怎么算那本关于PCR的书都有。自己动手丰衣足食。或许看书的时候你还有意外的收获。好运！
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2楼2010-04-12 13:42:05
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sunjiutong

金虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-12 21:02
一般是低的Tm值减去5度，你的应该在46度左右。自己在摸索一下哈
赞一下(2人) 回复此楼
所谓梦想，只有醒来才有可能实现
3楼2010-04-12 13:43:54
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zzw1221

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):同意 2010-04-12 21:02
做个梯度PCR 基本可以搞定，算得很多时候不太准，呵呵
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4楼2010-04-12 14:40:51
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刘仕博

金虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
觉得这个引物有点短哦~
赞一下(1人) 回复此楼
生命在于折腾~
5楼2010-04-12 17:02:58
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ydniu

铜虫 (正式写手)
引物好象不是一对呀？
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6楼2010-04-12 17:36:08
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by wangqk198738 at 2010-04-12 13:42:05:
要是算出来的都行，那就不是生物学了，还得实验，这个也是调出来的，要试很多次，把温度按区间调试。不信你等着瞧吧，至于怎么算那本关于PCR的书都有。自己动手丰衣足食。或许看书的时候你还有意外的收获。好运！ ...

哦，谢谢，我去图书馆查查
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就这么熬着，什么时候是个头……
7楼2010-04-12 19:47:48
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by sunjiutong at 2010-04-12 13:43:54:
一般是低的Tm值减去5度，你的应该在46度左右。自己在摸索一下哈

谢谢
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就这么熬着，什么时候是个头……
8楼2010-04-12 19:48:27
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by zzw1221 at 2010-04-12 14:40:51:
做个梯度PCR 基本可以搞定，算得很多时候不太准，呵呵

梯度PCR？就是一个一个温度的试？
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就这么熬着，什么时候是个头……
9楼2010-04-12 19:49:03
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by 刘仕博 at 2010-04-12 17:02:58:
觉得这个引物有点短哦~

不知道短不短，给的就是这个……
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就这么熬着，什么时候是个头……
10楼2010-04-12 19:49:36
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