【求助/交流】怎么算PCR的引物退火温度啊？ - 分子生物 - 综合其他

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银虫 (小有名气)

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我一般是在Tm值减去5度，你的应该是46，然后以46为中心用梯度PCR做一个退火温度优化，梯度PCR不是一个一个温度的试，而是有梯度PCR这种仪器。

31楼2010-04-20 16:24:04

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金虫 (正式写手)

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上游引物和下游引物Tm的平均值减去5度，开始一个一个温度试，上一度下一度的试。温度越高特异性越好，温度越低越容易出结果，但如果引物不好的话就温度低容易出杂带，如果又梯度PCR仪就直接做梯度PCR，比较省事。

32楼2010-04-20 17:20:25

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