应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】怎么算PCR的引物退火温度啊？
323/4返回列表上一页1234下一页
查看: 2321  |  回复: 31
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by wz-louis at 2010-04-13 07:04:34:
将左右两个引物的Tm值取个平均值，大概也就是55度左右，一般来讲，温度在上下不差5度都可以P出来！

确实，老师给的是56摄氏度。谢谢
赞一下 回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
21楼2010-04-13 20:30:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by gundamba at 2010-04-13 16:23:55:
放到PRIMAER5.0里面算一下，它会给出一个最佳的退火温度，然后你再适当的降低一点那个温度就可以了，你的引物有些短，记得加上酶切位点

谢谢，我会记得
回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
22楼2010-04-13 20:32:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
做梯度PCR
回复此楼
见得多爱的多
23楼2010-04-13 23:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

吟啸徐行

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-19 00:17
一般是Tm值减去5度， 但是都不准确，谁给你说个确定的温度就是忽悠你呢。你应该做个梯度PCR，通过摸索找出他的退火温度。循环数适当少一点，不要像正常的PCR一样，那样PCR量太多，即使你点少量的产物还是看不出亮度。
祝你成功！学会做梯度PCR吧，很有用。
赞一下(2人) 回复此楼
24楼2010-04-14 17:34:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by 吟啸徐行 at 2010-04-14 17:34:25:
一般是Tm值减去5度， 但是都不准确，谁给你说个确定的温度就是忽悠你呢。你应该做个梯度PCR，通过摸索找出他的退火温度。循环数适当少一点，不要像正常的PCR一样，那样PCR量太多，即使你点少量的产物还是看不出亮 ...

好的哦，梯度PCR。
回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
25楼2010-04-14 19:14:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by 邓娟 at 2010-04-13 20:32:37:


谢谢，我会记得

可以给个PRIMAER5.0下载地址不
赞一下 回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
26楼2010-04-18 23:15:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by zhang6871 at 2010-04-13 09:53:42:
1,引物应该是成对的，
2，退火温度是可以算出来的，用Oligo软件很轻松。

额，请问可以帮忙给个链接让我下载Oligo软件不？
赞一下 回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
27楼2010-04-18 23:24:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by zhang6871 at 2010-04-13 09:53:42:
1,引物应该是成对的，
2，退火温度是可以算出来的，用Oligo软件很轻松。

我的一对引物是BAR和BAF，前者的Tm是50.92摄氏度，后者是49.66摄氏度，你可以帮我算下大概的退火温度不？谢谢
赞一下 回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
28楼2010-04-19 19:05:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czhsr1123

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
Tm=4(G+C)+2(A+T)    一般是低的Tm值减去5度
赞一下(1人) 回复此楼
29楼2010-04-19 19:23:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邓娟

金虫 (小有名气)

Diary
引用回帖:
Originally posted by czhsr1123 at 2010-04-19 19:23:19:
Tm=4(G+C)+2(A+T)    一般是低的Tm值减去5度

BAR: 5'-GGCGTAACCCTCGTAGAT-3'
BAF: 5'-TGGTATGGGACGGAAAGA-3'
你给的公式里的AGCT是指引物里的各个碱基的个数吗？
这样算的是BAR:56摄氏度
               BAF：54摄氏度
是不是退火温度就为49摄氏度？
赞一下 回复此楼
就这么熬着，什么时候是个头……
30楼2010-04-19 20:33:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 邓娟 的主题更新
323/4返回列表上一页1234下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +11 wangze12014 2026-08-14 13/650 2026-08-21 11:00 by 大快人心啦
[基金申请] 我面上完蛋了 +6 且听虎啸 2026-08-20 6/300 2026-08-21 10:59 by Vivilian
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +10 zju2000 2026-08-16 11/550 2026-08-20 20:02 by cl479861084
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭