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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

[交流] 【求助/交流】怎么算PCR的引物退火温度啊?已有17人参与

我现在在做毕业论文,第一次做PCR,老师把引物合成报告单给我,我不知道怎么算,大家帮帮忙:
      BAR       5’-GGCGTAACCCTCGTAGAT-3'
      length:18      GC:55%
      MW: 5,500.60          nmoles per OD : 5.14
      Tm:  50.92摄氏度  (0.05M Na+);    59.28摄氏度(1M Na+)
      Package:1.00  OD  X  2   
      引物浓度老师说10um/L

[ Last edited by 邓娟 on 2010-4-12 at 13:28 ]
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就这么熬着,什么时候是个头……
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邓娟

金虫 (小有名气)

Diary

引用回帖:
Originally posted by zzw1221 at 2010-04-12 14:40:51:
做个梯度PCR 基本可以搞定,算得很多时候不太准,呵呵

梯度PCR?就是一个一个温度的试?
就这么熬着,什么时候是个头……
9楼2010-04-12 19:49:03
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wangqk198738

金虫 (正式写手)

光算是不行的

★ ★ ★
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amisking(金币+2): 2010-04-12 20:42
要是算出来的都行,那就不是生物学了,还得实验,这个也是调出来的,要试很多次,把温度按区间调试。不信你等着瞧吧,至于怎么算那本关于PCR的书都有。自己动手丰衣足食。或许看书的时候你还有意外的收获。好运!
2楼2010-04-12 13:42:05
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sunjiutong

金虫 (著名写手)

★ ★
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1949stone(金币+1): 2010-04-12 21:02
一般是低的Tm值减去5度,你的应该在46度左右。自己在摸索一下哈
所谓梦想,只有醒来才有可能实现
3楼2010-04-12 13:43:54
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zzw1221

木虫 (著名写手)

★ ★ ★
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1949stone(金币+2):同意 2010-04-12 21:02
做个梯度PCR 基本可以搞定,算得很多时候不太准,呵呵
4楼2010-04-12 14:40:51
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