应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】酶切失败分析
101/1返回列表
查看: 942  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。

xiaomu3811

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】酶切失败分析 已有9人参与

用BstXI（最适温度45）和EcoRI（最适温度37）双酶切pFL61载体,结果切不动，麻烦帮忙分析一下原因。

BstXI：1

EcoRI：1

10*Hbuffer：2

质粒：5

水：11

总体系：20

酶切条件：先在37°酶切3小时，再于45°酶切3小时。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2010-04-08 22:55:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

DNAhelix

银虫 (著名写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+1):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 23:37
是切空载？
看到右边两条亮带的带型，感觉被切了。
赞一下(2人) 回复此楼
智慧活法：不生气，不计较！
2楼2010-04-08 23:08:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

1110rainjob

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+2):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-08 23:37
H buffer是这两个酶双酶切时的公用buffer么？
你能否把你电泳图上的样品各是什么样品标示一下？
如果最左边的第一个是未切前的载体，后几个是切后的样品，那么从分子量之间的差异，感觉你的载体已经切开了。你要切下多大的片段啊？
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-04-08 23:13:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-09 10:32
表达不完全，切开了能切下多大的片段啊？
建议首先加EcoRI，37℃反应俩个小时后，补加BstXI然后45℃反应两个小时；
要是效果还是不好的话，只能是单酶切回收后再用另一种酶
赞一下(2人) 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
4楼2010-04-09 08:52:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

快乐由自己go

银虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2): 2010-04-09 10:32
把各个泳道的样品标明一下吧。如果图片可以旋转180度，会更方便看些。关注中……
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2010-04-09 09:04:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaozx123

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1): 2010-04-09 10:32
为什么不一个个酶切呢，一般先进行低温度的酶切，再进行高温度的酶切，还有就是要注意所用酶的缓冲液。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-04-09 09:14:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaomu3811

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
1949stone(金币+1):欢迎发图 2010-04-09 10:33
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-04-09 12:42
引用回帖:
Originally posted by DNAhelix at 2010-04-08 23:08:06:
是切空载？
看到右边两条亮带的带型，感觉被切了。

理论上切开了的话，应该切出两条带，一条越为850bp,另一条约为4500bp,我把我的载体图和酶切后电泳图重新上传，希望大家帮忙分析分析。电泳图上两边为marker，中间是酶切的同一质粒。
赞一下(2人) 回复此楼
7楼2010-04-09 09:38:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lyg7720349

铜虫 (小有名气)
是不是温度没掌握好
赞一下 回复此楼
望大家都各有所获！
8楼2010-04-09 12:59:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crab1983

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
scelab(金币+3):欢迎多来交流！:tiger06: 2010-04-10 11:48
我觉得你这个两个酶不能同时切 你这个酶是哪个公司的 你可以打电话给他们公司的技术部  问问这两个酶怎么切  我觉得你应该切完一个沉淀回收 然后再切下一个  你最好是打电话问问 我曾经也是双酶切 两个酶不能同时切 我打电话问了宝生物的技术部 他们就解答我了 我用的酶是宝生物的
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-04-09 15:21:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

琴瑟不鸣

铁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
你的buffer 用的对不对啊？一般里面有两种buffer 的，，，一种是用单酶切的，，一种是双酶切的，，，要是双酶切的话，，你最好去试剂公司的网站看看，，，选个合适的啊，，，
赞一下(1人) 回复此楼
老虎
10楼2010-04-12 16:44:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 xiaomu3811 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +5 yuleib84 2026-08-19 6/300 2026-08-21 08:25 by gltch
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 基金啊基金 +3 longfie172 2026-08-20 3/150 2026-08-21 00:04 by wuchongjun
[基金申请] 科研孤儿太难了 +14 我4大白菜 2026-08-20 15/750 2026-08-20 22:33 by 袁向阳007
[基金申请] 时间戳又变了 +12 wuchongjun 2026-08-20 17/850 2026-08-20 20:05 by spzhao
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+3 snowwithsea 2026-08-19 12/600 2026-08-20 15:56 by lfy8008
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +14 kkkl_v 2026-08-19 15/750 2026-08-20 08:21 by sunzitan
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭